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克伦特罗（Clenbuterol，CLB）和沙丁胺醇（Salbutamol，SAL）属于β2-肾上腺受体激动剂，通常被称作“营养重分配剂”或是“瘦肉精”，因其具有营养再分配、改变动物体内物质的代谢途径，加速蛋白质的合成，显著提高食品动物的生长速度等生理作用，经常被非法用作饲料添加剂用于畜产品养殖业中来谋取利益。当动物体内残留的β2-受体激动剂通过食物链进入人体后，会对食用者产生一定的毒副作用，导致中毒现象。目前，我国和欧盟等许多国家已颁布了多部法律法规明确规定不允许将β2-受体激动剂作为动物饲料添加剂。因此，为加强食品安全监管，保障广大消费者的生命安全和利益，急需在现有的方法上建立更加快速、可靠的β2-受体激动剂检测方法。现有的确证检测方法有色谱法、常规酶联免疫法等，但其因前处理麻烦、操作复杂、检测时间较长等原因，无法实现实际样品的高通量检测。如今，由于具有灵敏度高、干扰小、检测速度快等优点，表面等离子体传感器在β2-受体激动剂的检测中具有重要的应用前景。
本研究以克伦特罗和沙丁胺醇为检测目标物，首先制备了CLB和SAL单克隆抗体。将CLB-BSA和SAL-OVA作为实验中所需要使用的免疫原，取6-8周龄的雌性BALB/c小鼠，用选取的免疫原首先对小鼠进行免疫。对免疫后的小鼠进行血清效价检测，检测结果最好的小鼠说明其免疫效果最好，选取免疫效果最好的小鼠，脱颈处死后取其脾细胞，将脾细胞和复苏后的骨髓瘤细胞融合在一起，经间接ELISA法挑选出阳性细胞，再对连续三次检测呈阳性的细胞进行亚克隆，得到高效价、具有特异性且能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用诱生腹水法进行腹水制备，将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内产生腹水的方法收集抗体。对单抗的性质进行鉴定，得到CLB单克隆抗体腹水效价为1:4.50×106，SAL单克隆抗体效价为1:3.40×105；使用间接竞争ELISA法对两种单克隆抗体的特异性鉴定结果显示，CLB单抗对克伦特罗的IC50为2ng/mL,对莱克多巴胺和沙丁胺醇等药物的IC50均大于10000，交叉反应率小于0.2%，SAL单抗对沙丁胺醇的IC50为2.5ng/mL，在对其他几种药物的检测中发现，此抗体对克伦特罗的IC50为11.3ng/mL，计算得二者的交叉反应率为22%，而对其他药物的交叉反应率仍小于0.2%。
本研究建立了直接检测牛尿中克伦特罗和沙丁胺醇的SPR免疫传感器法。以氨基偶联法修饰CM7芯片，将抗体固定在芯片上，优化抗体偶联条件，以10mM pH5.0醋酸-醋酸钠缓冲液为耦合缓冲剂，EDC和NHS以1：1的比例混合活化芯片，活化时间为15min，抗体反应时间为20min，用乙醇胺溶液封闭芯片，封闭时间为15min。采用直接检测法，将牛尿离心、过膜处理后，流过固定了抗体的CM7芯片来构建标准曲线，进行检测。经方法学验证，克伦特罗的标准曲线的线性范围在0.1~6ng/mL之间，得到的最低检测限（LOD）为0.05ng/mL。在1ng/mL~5ng/mL添加浓度范围内，牛尿中克伦特罗的平均回收率为82.46％~98.60％，批内变异系数为1.67％~8.50％，批间变异系数为2.61％~10.14％。以相同的方法对沙丁胺醇进行测定，在0.1~6ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系，LOD为0.01ng/mL，在1ng/mL~5ng/mL添加浓度范围内，牛尿中沙丁胺醇的平均回收率为87.82%～91.67%，批内变异系数为1.51％~2.67％，批间变异系数为2.67％~5.53％。采用UPLC-MS/MS法和SPR生物传感器法对牛尿样品中CLB和SAL的含量进行对比，结果表明SPR方法可用于动物中克伦特罗和沙丁胺醇的检测。
本研究以克伦特罗和沙丁胺醇为检测目标物，首先制备了CLB和SAL单克隆抗体。将CLB-BSA和SAL-OVA作为实验中所需要使用的免疫原，取6-8周龄的雌性BALB/c小鼠，用选取的免疫原首先对小鼠进行免疫。对免疫后的小鼠进行血清效价检测，检测结果最好的小鼠说明其免疫效果最好，选取免疫效果最好的小鼠，脱颈处死后取其脾细胞，将脾细胞和复苏后的骨髓瘤细胞融合在一起，经间接ELISA法挑选出阳性细胞，再对连续三次检测呈阳性的细胞进行亚克隆，得到高效价、具有特异性且能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用诱生腹水法进行腹水制备，将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内产生腹水的方法收集抗体。对单抗的性质进行鉴定，得到CLB单克隆抗体腹水效价为1:4.50×106，SAL单克隆抗体效价为1:3.40×105；使用间接竞争ELISA法对两种单克隆抗体的特异性鉴定结果显示，CLB单抗对克伦特罗的IC50为2ng/mL,对莱克多巴胺和沙丁胺醇等药物的IC50均大于10000，交叉反应率小于0.2%，SAL单抗对沙丁胺醇的IC50为2.5ng/mL，在对其他几种药物的检测中发现，此抗体对克伦特罗的IC50为11.3ng/mL，计算得二者的交叉反应率为22%，而对其他药物的交叉反应率仍小于0.2%。
本研究建立了直接检测牛尿中克伦特罗和沙丁胺醇的SPR免疫传感器法。以氨基偶联法修饰CM7芯片，将抗体固定在芯片上，优化抗体偶联条件，以10mM pH5.0醋酸-醋酸钠缓冲液为耦合缓冲剂，EDC和NHS以1：1的比例混合活化芯片，活化时间为15min，抗体反应时间为20min，用乙醇胺溶液封闭芯片，封闭时间为15min。采用直接检测法，将牛尿离心、过膜处理后，流过固定了抗体的CM7芯片来构建标准曲线，进行检测。经方法学验证，克伦特罗的标准曲线的线性范围在0.1~6ng/mL之间，得到的最低检测限（LOD）为0.05ng/mL。在1ng/mL~5ng/mL添加浓度范围内，牛尿中克伦特罗的平均回收率为82.46％~98.60％，批内变异系数为1.67％~8.50％，批间变异系数为2.61％~10.14％。以相同的方法对沙丁胺醇进行测定，在0.1~6ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系，LOD为0.01ng/mL，在1ng/mL~5ng/mL添加浓度范围内，牛尿中沙丁胺醇的平均回收率为87.82%～91.67%，批内变异系数为1.51％~2.67％，批间变异系数为2.67％~5.53％。采用UPLC-MS/MS法和SPR生物传感器法对牛尿样品中CLB和SAL的含量进行对比，结果表明SPR方法可用于动物中克伦特罗和沙丁胺醇的检测。