急性肾损伤（Acute kidney injury,AKI）是一种临床常见急危重症,由多种因素导致,表现为肾功能急剧下降,肾小管上皮坏死。AKI的发病率和死亡率正呈逐年增加趋势,且近三分之一的存活患者终将发展至慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）或终末期肾病（End stage renal disease,ESRD）。大量研究证实AKI是导致慢性肾脏病发生发展的一个重要危险因素。因此探究AKI新的发病机理,寻找AKI新的治疗靶点是世界范围内的热点问题。脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）是一种革兰氏阴性菌产生的内毒素,也是AKI的诱因。LPS可促进肾脏中多种促炎性细胞因子的释放,从而激活活性氧的产生并引发肾小管细胞凋亡。LPS诱发AKI的病因较为复杂,病理生理机制较为特殊,给患者造成严重的预后不良风险,因此,寻找新的发病机制及治疗靶点具有重要意义。近年micro RNA成为疾病研究的热点。目前miR-214的研究主要都是关于肿瘤和心血管疾病等,研究micro RNA的表达水平与急性肾损伤相关。但miR-214在LPS诱导的AKI中的作用仍不明确。因此,本课题将探究miR-214在LPS诱导的急性肾损伤中的作用及发生机制。第一部分实验,将体重及体温相近的C57小鼠分为三组（Anti-Control组、LPS组、Anti-miR-214+LPS组）。按照以上分组,首先经腹腔注射分别给予小鼠Anti-miR-214（10 mg/kg）及相应的对照处理（10mg/kg）,并于次日经腹腔注射给予LPS刺激,24 h后观察各组小鼠体重及体温的变化。结果显示仅注射LPS的小鼠肛温和体重与对照组小鼠对比显著下降,由此表明LPS成功诱导急性肾损伤模型。而与LPS组对比,注射Anti-miR-214的小鼠体重及肛温均有逆转。通过下腔静脉取血,并分离血浆,生化分析仪检测血浆中血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）的变化。结果显示LPS组血浆中的SCr、BUN、LDH、AST与对照组相比均显著升高而ALT并没有显著升高。与此同时,抑制miR-214表达后血浆中SCr、BUN、LDH、AST浓度相较于LPS组均显著降低。通过ELISA实验对小鼠血清中IL-6的浓度进行检测发现,LPS组中的血清IL-6浓度显著高于对照组,抑制miR-214后血清中IL-6浓度显著低于LPS组。血清中的IL-6浓度是代表全身性器官的IL-6浓度,也就是全身性炎症的一个评估,因此还需要进一步对肾脏中IL-6浓度进行检测。利用q RT-PCR检测miR-214的抑制效率、炎症相关指标,例如IL-6、TNF-α等,肾损伤指标NGAL、KIM-1,细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3。结果显示注射Anti-miR-214可有效抑制miR-214表达,且在一定程度上逆转LPS诱导的肾损伤、肾脏炎症反应以及细胞凋亡。提取肾组织蛋白,利用Western检测炎症相关的趋化因子MCP-1以及肾损伤指标NGAL的表达,结果与m RNA的结果一致。以上实验结果提示下调miR-214对LPS诱导的急性肾损伤具有保护作用。但这种损伤的减轻是是肾脏自身的损伤修复,还是由于全身炎症反应减轻而继发产生的仍不明确,还有待进一步探究。基于第一部分的实验结果,我们利用肾小管特异性敲除miR-214的敲除小鼠(Kap-Cre/miR-214fl/fl)制备LPS诱导的急性肾损伤模型。通过生化分析仪检测血浆中SCr、BUN、LDH、ALT、AST等的变化。敲除小鼠与对照组相比SCr、BUN、LDH、ALT浓度均明显降低。提取肾脏组织RNA,通过q RT-PCR检测miR-214敲除效率、肾损伤相关指标NGAL、KIM-1的表达量,结果显示敲除鼠miR-214水平显著降低。与对照组相比,敲除鼠NGAL与KIM-1水平也有所降低。炎症指标IL-6的m RNA表达显著降低,而IL-1β、IP-10降低的趋势并不显著。通过q RT-PCR检测肾脏组织中凋亡相关指标Bax、Bcl-2的m RNA表达水平,同时进一步通过Western blot检测Bcl-2以及Caspase-3、Cleaved-Caspase-3的蛋白水平表达,结果显示,敲低miR-214可显著减少LPS诱导的细胞凋亡。综上,抑制miR-214可显著减轻LPS诱导的急性肾损伤,为靶向调控miR-214防治AKI提供了依据。