【摘 要】
：
中心法则提出之后,人们认识到疾病发生的根源是基因发生有害缺陷或突变,基因治疗应运而生。但由于基因本身易被降解的缺陷,需要载体来负载基因进行治疗。病毒载体虽然具有极高的基因转染效率,但其免疫原性致命,且外源基因可能会永久整合到宿主细胞染色体中,存在潜在的诱癌风险,近年来,随着纳米医学技术的发展,非病毒载体由于便于功能化修饰在递送基因过程中取得理想的效果,成为目前研究的热点。本研究针对非病毒载体在递送
论文部分内容阅读
中心法则提出之后,人们认识到疾病发生的根源是基因发生有害缺陷或突变,基因治疗应运而生。但由于基因本身易被降解的缺陷,需要载体来负载基因进行治疗。病毒载体虽然具有极高的基因转染效率,但其免疫原性致命,且外源基因可能会永久整合到宿主细胞染色体中,存在潜在的诱癌风险,近年来,随着纳米医学技术的发展,非病毒载体由于便于功能化修饰在递送基因过程中取得理想的效果,成为目前研究的热点。本研究针对非病毒载体在递送基因过程中所面临的多级生理屏障,设计合成了一种具有多级响应性的基因递送系统。以聚赖氨酸（PLys）为核心,二硫键（S-S）交联结合基因,温敏中间层聚丙基丙烯酰胺（PNIPAM）保护基因,聚乙二醇（PEG）外壳延长血液循环时间,主动靶向（RGD）增加肿瘤富集,基质金属蛋白酶2（MMP-2）响应短肽（GPLGVRG）去PEG化增加内吞以及胞内运输效率。本研究为基因治疗提供了一种可行性策略,具体研究内容如下:1、阳离子载体的合成与表征通过酰胺反应、点击反应和开环聚合反应等合成方法合成了多个基因递送载体PEG-PLys-SH、PEG-GPLGVRG-PLys-SH、RGD-PEG-GPLGVRG-PLys-SH、PNIPAM-PLys-SH.2、载体/基因复合物的制备及理化性质通过琼脂糖凝胶电泳实验和肝素竞争实验验证了载体结合基因的能力及稳定性;动态光散射（DLS）观察复合物的粒径及电位,各载体/基因复合物粒径80-90 nm,电位3-5 m V,接近电中性;MTT细胞毒性实验证实了细胞存活率高,载体生物相容性好。3、载体及载体/基因复合物各级微环境响应性及基因转染通过琼脂糖凝胶电泳实验和肝素竞争实验验证了复合物胞内还原环境响应性;核酸酶保护、DLS、透射电子显微镜（TEM）、核磁共振氢谱（1H NMR）验证温敏复合物温度响应性,温度由室温升高至生理温度,中间屏障由亲水变为疏水;激光共聚焦显微镜（CLSM）、流式细胞仪（FCM）验证主动靶向性,加入RGD细胞摄取效率增加约3倍;凝胶渗透色谱（GPC）、DLS、CLSM、FCM、乳酸脱氢酶（LDH）活性实验验证MMP响应去PEG化性能,去PEG化之后载体分子量有明显变化,复合物电位升高,细胞摄取能力增加约6倍,溶酶体逃逸速度加快;倒置荧光显微镜观察了复合物的基因转染能力,加入主动靶向RGD以及去PEG化策略都提升了复合物的基因转染能力。4、温敏载体/基因复合物联合索拉菲尼体内抑癌能力通过荷瘤小鼠体内抑癌实验,证明相较于单基因和药物治疗组,联合治疗组肿瘤体积增长最为缓慢,抑癌效果最为明显;苏木精-伊红（HE）染色结果表明所有治疗组均对小鼠主要器官没有明显的毒副作用;血管内皮生长因子（VEGF）免疫组化验证了治疗基因通过抑制VEGF表达达到抗肿瘤效果。
其他文献
随着纳米医学的进步与发展,众多纳米载体被广泛应用于肿瘤的基因治疗或药物治疗。然而,现有的基因/药物递送载体存在制备复杂、成本较高、靶向性低等缺陷,亟需解决。本论文中,我们构建了基于聚多巴胺的双靶向纳米基因递送平台以及基于纳米氧化石墨烯的具有p H响应性的药物递送平台以解决上述问题。开展两项具体工作内容如下:（1）结合睡美人转座子的功能化PDA/DEX-PEI@HA纳米颗粒递送CRISPR/Cas9
临床上,在脊柱融合术中使用椎间融合器介入治疗,已经成为恢复医源性脊柱不稳定的主要方式。由于融合器具有实现术后即刻稳定、恢复正常生理曲度,促进植骨融合方面发挥重要的作用,因而在理论研究和临床应用上得到了快速发展。但由于椎间融合器的规格与患者病理环境的不匹配,使用具有统一尺寸、形状的椎间融合器（多面向腰椎设计）极可能导致术后融合器的下沉、移位、不融合等融合失效现象（如传统子弹头型腰椎椎间融合器不再适应
胰腺炎是一种胰腺因胰蛋白酶的自身消化而引起的危害严重的疾病。胰腺炎通常会引起腺泡细胞萎缩,胰腺组织坏死,严重时还会导致全身炎症反应和多器官功能损伤或衰竭。目前胰腺炎的治疗方式存在一定弊端,胰腺炎的死亡率和复发率仍没有得到改善。因此,开发新的治疗胰腺炎的方法是目前亟待解决的问题。氧化应激是引发胰腺炎的重要因素,活性氧（ROS）诱导的氧化应激可以激活NF-κB信号通路,从而促进胰腺炎的发生发展。我们联
特发性膜性肾病（idiopathic membranous nephropathy,IMN）是一种自身免疫性疾病。IMN诊断的最主要分子标志物是抗M型磷脂酶A2受体（PLA2R）的自身抗体（anti-PLA2R）,存在于超过80%IMN患者体内,在健康人体内不存在。anti-PLA2R结合肾小球足细胞表面的PLA2R,形成原位免疫复合物,攻击肾小球足细胞,导致肾小球滤过屏障破坏,最终导致IMN。已
近年来,心血管疾病已经成为了世界各地死亡率上升的主要原因之一。医学影像技术的飞速发展为提高心血管疾病的预测精度做出了巨大贡献。目前,在冠状动脉疾病的诊断与研究中,冠状动脉CT血管造影（Coronary CT Angiography,CCTA）发挥了重要作用。然而,在CT的成像过程中,胸部和心脏部位相比较其他身体部位更容易受到不理想的屏气和心脏搏动的影响,使得CCTA图像中存在运动伪影。运动伪影会使
去泛素化酶（Deubiquitinating Enzymes,DUBs）是哺乳动物体内一类重要的翻译后修饰酶,近些年来研究发现,在多种癌症中,DUBs家族成员参与癌症相关蛋白的翻译后修饰,从而调控癌症的发生发展与预后。泛素特异性蛋白酶（Ubiquitin-specific protease13,USP）家族是DUBs中数量最庞大的一类,也是与乳腺癌关系最密切的一类去泛素化酶亚家族。USP家族成员U
血压作为人体健康评估常用的生理指标,包含着重要的人体生理信息。在一些特殊情况下,如重症监护室的病人需要长时间连续监测血压,及时发现异常血压以监控其健康状况和控制用药。而临床常用的连续血压监测方法是侵入式的,会引起病人的不适。此外,无创连续地监测血压在日常生活中对避免由异常血压引发的心血管疾病也有很大帮助。通过体表信号进行连续血压监测能降低病人的不适感,及时发现异常血压并控制。在可观测的体表信号中,
染色体区域维护蛋白1（XPO1）,也被称为CRM1,最初在裂殖酵母中被发现。XPO1最初是通过其基因的突变被提取研究。XPO1后来被发现是一个重要的核输出受体。结外自然杀伤细胞（NK）/T细胞淋巴瘤（ENKTL）因其侵袭性和预后较差的特点,已成为近年来的活跃研究领域。本课题通过计算机辅助药物设计的方法,针对XPO1蛋白探索研究了新型靶向性小分子化合物抑制剂,并探索了其对XPO1蛋白的体外结合能力以
抗体功能化微纳材料因其亲和力和特异性的优势被广泛应用于临床诊断、生物分离纯化和环境与食品检测等领域,其中材料表面抗体分子状态（密度、取向等）的调控、非特异性吸附是开发抗体功能化材料的关键科学问题。本文制备了一系列不同电性高分子刷修饰的纳米粒子,通过物理吸附固定抗HCG抗体。考察了抗体种类、电荷密度、溶液离子强度、p H和复杂生化液体等多种因素对抗体固定及其抗原结合活性影响;选择最佳孵育条件用于竞争
高频神经电刺激,又称为千赫兹交流电（kilo hertz alternative current,KHAC）神经传导阻断,可以对神经的传导功能造成可逆的抑制效果,具有良好的临床应用前景:包括阵痛、麻醉、缓解痉挛、帮助尿道功能障碍患者排尿等。然而,在研究过程中发现,高频交流电对神经传导功能的抑制不是完全可逆的,即阻断神经的同时往往伴随着损伤。为了提高电刺激的阻断效果并同时降低附带的神经损伤,有必要对