【摘 要】
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全球环境重金属污染形势日益严峻。重金属污染降低作物产量,并可通过食物链在人体内富集,进而威胁人类健康。植物修复是治理环境重金属污染的一种高效、经济和环保的技术,主
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全球环境重金属污染形势日益严峻。重金属污染降低作物产量,并可通过食物链在人体内富集,进而威胁人类健康。植物修复是治理环境重金属污染的一种高效、经济和环保的技术,主要利用绿色植物吸收环境中的重金属,并在植物地上部富集重金属,进而降低原位重金属含量。研究植物对重金属耐受和富集的机制,有利于发展植物修复技术。本论文初步研究了AtOPT4和AtNRAMP2在植物应答重金属胁迫过程中的作用。谷胱甘肽(GSH)是植物耐受重金属的重要生物小分子,可调控重金属在植物体内的长距离运输。前期研究表明,AtOPT4是植物细胞膜上的GSH转运蛋白,但是其功能未知。qRT-PCR分析结果发现AtOPT4在根、茎、叶中均有表达,在角果中表达量最高;GUS染色进一步表明,AtOPT4主要在叶脉、茎的维管组织中表达,在角果柄和假隔膜处有高量表达。在T-DNA插入突变体opt4中,通过测定各组织的GSH含量,发现opt4角果中GSH的含量显著降低。镉(Cd)胁迫下,AtOPT4在叶片和角果中的表达下调;在opt4突变体中,角果的Cd含量显著降低,其他营养元素的含量与野生型无差别。在模拟渗透胁迫和高盐胁迫条件下,观察opt4突变体与野生型的生长情况,发现opt4突变体在种子萌发早期的抗逆性有所提高,而突变体在营养生长阶段与野生型无差别;将AtOPT4基因转入酿酒酵母中进行异源表达分析,发现转基因酵母细胞内的Cd含量显著降低。以上结果表明,AtOPT4可以转运Cd,并调控了拟南芥角果中GSH的含量和重金属Cd的积累量。拟南芥NRAMP家族有6个基因,其中AtNRAMP2的功能并不清楚。在酿酒酵母中异源表达AtNRAMP2,通过测定生长曲线发现AtNRAMP2转基因酵母对Cd的敏感性增强,对Cd的富集量也增加,说明AtNRAMP2可以转运Cd;通过qRT-PCR分析基因表达,发现AtNRAMP2在拟南芥的根、茎、叶中均有表达,在Cd胁迫下,AtNRAMP2在地上部分的表达显著下调。对AtNRAMP2的T-DNA插入突变体进行表型分析,结果发现突变体与野生型对Cd的耐受能力没有差异,对Cd的富集量也没有差异。这说明在拟南芥中存在其他功能冗余的基因掩盖了AtNRAMP2的功能。我们需要进一步创建多基因突变体,研究AtNRAMP2在植物应答Cd胁迫中的作用。
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