多发性骨髓瘤核型分析与FISH检测实验条件优化的探讨

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目的:通过联合应用细胞因子并延长培养时间优化多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞培养体系,优化荧光原位杂交(fluorescence in Situ hybridization,FISH)实验流程并建立稳定的荧光免疫表型结合间期原位杂交(fluorescence immunophenotyping and interphase cytogenetics as a tool for the investigation of neoplasms,FICTION)技术的实验室条件,探讨三种方法在提高MM遗传学异常检出率中的应用价值,为MM的预后判断与临床诊疗提供更加可靠的实验室依据。方法:1.22例MM患者骨髓标本分别经常规24h短期培养法和改良法,即添加IL-6(10ng/m L)+GM-CSF(40ng/m L)并延长至6d培养法,分析改良法能否有效提高传统细胞遗传学分析(conventional cytogenetic analysis,CCA)对MM患者遗传学异常的检出率。2.20例MM患者的骨髓标本经Triton X-100/4%PFA预处理后再进行FISH检测,观察预处理能否有效改善FISH检测时探针的荧光信号质量。3.19例MM患者的骨髓标本同时进行CCA、常规FISH和FICTION检测,探讨FICTION技术对MM患者遗传学异常检出率的影响。结果:1.改善培养条件后,可供分析的染色体核型数目和质量显著提高,培养成功率从77.3%提高到86.4%,异常检出率从9.1%提高到40.9%。2.经Triton X-100/4%PFA预处理后,FISH检测的探针信号增强,杂点减少,背景荧光显著降低,1q21、RB1、D13S319、P53、Ig H探针检测到的无信号细胞均明显减少,差异均有统计学意义,五种探针的P值依次是0.008、0.002、0.001、0.002与0.001。3.FICTION的异常检出率(89.5%)较FISH的(60.0%)有显著提高(P=0.030)。15例FISH检出异常克隆或处于临界值的MM标本,FICTION检测时异常细胞比例更高,除了P53,1q21、RB1、D13S319和Ig H四种探针差异有显著性,P值依次为0.000、0.038、0.004和0.001。4.改良CCA和FICTION联用可提高MM患者遗传学异常检出率。结论:添加细胞因子IL-6+GM-CSF并延长培养时间可明显提高MM骨髓标本的培养成功率与CCA的异常检出率;应用Triton X-100/4%PFA可明显改善FISH检测时探针的荧光信号质量;FICTION比普通FISH的异常检出率更高;改良CCA与FICTION联合应用,可提高MM患者遗传学异常检出率。
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