背景蕈样肉芽肿,英文mycosis fungoides（MF）是一种原发于皮肤的非霍奇金淋巴瘤。MF是皮肤T细胞淋巴瘤病例中占比最大的一型,占全部病例的39%～50%。MF主要累及皮肤,早期病例可仅有皮肤受累。MF皮损表现为斑片、斑块和肿瘤,严重者可出现累及全身皮肤的红皮病样表现。MF的发病机制目前尚不明确,近年来有研究显示肿瘤微环境在MF的发生发展中发挥重要作用。MF具有“亲表皮现象”的组织病理特征,既往研究显示表皮微环境与MF的发生、演变密切相关,因而表皮微环境是MF肿瘤微环境的重要组成部分,具有重要的研究价值。角质层蛋白质谱作为一种成熟的技术手段,已经在皮肤病学领域产生大量研究成果。此方法可针对皮损和非皮损部位进行快捷、简便、无创的样本采集,结合蛋白质谱,最终获取大量角质层蛋白表达数据,高度适合探究MF表皮微环境改变,进而筛选诊断标志物、关键信号通路及其调控分子,开展针对性研究,探索其表达与功能。目前,此种研究方法在MF中应用尚较少,具有广阔的研究前景。目的1.采集早期MF病例角质层蛋白,进行蛋白质谱,分析差异表达蛋白及相关信号转导通路,探究早期MF表皮微环境特征。2.筛选具有研究价值的信号通路,探究其关键蛋白在全层表皮的表达情况,并探究可能与MF发生发展相关的分子功能。方法1.采用胶带剥离法收集早期MF病例皮损部位及对应正常部位皮肤角质层蛋白,提取蛋白进行液相二级质谱,并进行Gene Ontology、Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes、Ingenuity Pathway Analysis 等生物信息学分析。2.筛选具有研究价值的信号通路,进行免疫组化染色或酶联免疫吸附试验验证其关键分子在全层表皮的表达情况。3.针对关键蛋白,建立基因过表达及敲低的细胞系,通过细胞学实验探究其功能。结果1.本研究共收集18份早期MF角质层蛋白样本（9例病例自身对照）,定量鉴定348个差异表达蛋白。2.生物信息学分析显示,本研究所鉴定差异表达蛋白显著富集于NOD样受体通路、细菌侵入上皮通路、TCR信号转导、TGF-β信号转导通路、上皮细胞黏附、网格蛋白介导的胞吞作用、整合素信号转导等多条炎症或信号转导通路。3.本研究共对23例MF皮损组织进行免疫组化染色,证实MF表皮中ERK2、NAMPT、SUGT1、GBP1、GBP2、SEPTIN9免疫组化染色光密度显著高于对照组。MF表皮和真皮中细胞粘附分子1（cell adhesion molecule 1,CADM1）免疫组化染色光密度也显著高于各自对照组。4.本研究成功构建过表达、敲低CADM1的MF肿瘤细胞系并检测细胞系增殖情况变化,结果显示CADM1过表达组细胞增殖活性显著高于对照组,而敲低组细胞增殖活性显著低于对照组。结论1.本研究对早期MF角质层蛋白进行液相二级质谱分析,发现差异蛋白富集于NOD样受体通路、细菌侵入上皮通路、TCR信号转导、TGF-β信号转导通路、上皮细胞黏附、网格蛋白介导的胞吞作用、整合素信号通路等多条炎症或信号通路,提示上述通路可能参与MF病理生理过程。2.本研究通过免疫组化进行组织表达验证,证实早期MF表皮中NOD样受体通路关键蛋白ERK2、NAMPT、SUGT1、GBP1、GBP2表达上调,提示该通路被激活,可能在MF表皮微环境形成中发挥重要作用。3.免疫组化显示早期MF表皮中细菌侵入上皮细胞（拉链模式）过程中的关键蛋白SEPTIN9表达上调,提示该通路在MF表皮中可能被激活。4.本研究首次发现CADM1可促进MF肿瘤细胞增殖,提示CADM1相关信号转导可能是MF发病过程中的重要环节之一。5.本研究展示了角质层蛋白质谱结合生物信息学分析在MF表皮微环境研究中的应用价值和潜力,为后续筛选诊断标志物和关键信号通路及调控分子、探究发病机制、开发辅助诊断和病情监测手段、构建预测模型提供了思路。