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目的:研究大黄素(Emodin)联合3’-叠氮-3’-脱氧胸腺核苷(3 ’-azido-3 ’-deoxythymidine,Azidothymidine,AZT)抗慢性粒细胞白血病K562协同效应。并进一步探讨两药的协同作用的分子机制,为临床联合靶向治疗白血病提供新途径和新思路。方法:常规培养慢性粒细胞白血病K562细胞系,采用MTT法检测不同浓度大黄素(8,16,and 32μM)、AZT(80,160,and 320 μM)及大黄素联合AZT对K562细胞增殖的影响,采用Calcusyn 2.0软件,计算两种药物的协同指数(Combination index,CI);流式细胞仪检测大黄素(32μM)、AZT(320μM)及大黄素联合AZT对K562细胞凋亡率和细胞周期的影响;RT-PCR分别检测大黄素(32μM)、AZT(320μM)及大黄素联合AZT干预K562细胞后Egr-1 mRNA基因表达量。采用电转染法瞬时转染细胞,细胞分为空白对照、非特异对照(转染非特异序列)和目的转染Egr-1 siRNA3组。6小时后利用倒置荧光显微镜观察细胞转染情况并且用RT-PCR检测细胞转染率;各组细胞采用大黄素(32μM)、AZT(320μM)及大黄素联合AZT处理72小时后,采用Western blotting检测未转染细胞和Egr-1 siRNA细胞中β-catenin蛋白的表达水平。结果:和各单独用药组相比,大黄素联合AZT72小时后对K562细胞的增殖抑制率明显增高,并且具有明显的协同作用(协同作用指数CI<1)。两种药物之间增殖抑制和协同作用呈现出一种浓度依赖性和时间依赖性。流式细胞术检测结果显示,与对照组(无药物干预)和单独给药组相比,大黄素联合AZT干预K562细胞的凋亡率明显增高(P<0.05)。同时用大黄素和AZT处理K562细胞48小时后,Go/Gi期细胞增加;G2/M期细胞和S期细胞减少(P<0.05)。表明细胞在Go/Gi期停滞,大黄素联合AZT对K562细胞周期阻滞明显高于单独用药组(P<0.05)。RT-PCR结果表明,与对照组和单独给药组相比,大黄素联合AZT干预组K562细胞中Egr-1mRNA基因表达水平上调(P<0.05)。表明联合组对Egr-1基因表达具有增强的作用。倒置显微镜下可观察到转染成功的FAM荧光蛋白标记的siRNA细胞在荧光显微镜下发绿色荧光。RT-PCR检测结果显示,与空白对照和非特异性对照(非特异序列)相比,目的siRNA转染的Egr-1的表达水平降低(P<0.01)。采用免疫蛋白印迹法检测结果显示,分别与单独大黄素(32μM)和AZT(320μM)干预K562细胞相比,大黄素联合AZT(32μM/320μM)处理组WNT/β-catenin信号通路中β-catenin蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与未转染的K562细胞相比,3组目的siRNA组中β-catenin蛋白的表达显着升高,差异有统计学意义(P<0.05)。三组非特异性转染siRNA与未转染的K562细胞相比,β-catenin蛋白表达水平无显著差异(P>0.05)。结论:大黄素联合AZT抑制慢性粒细胞白血病K562细胞增殖,促进凋亡和阻滞细胞周期变化,二者具有协同作用,其作用机制可能与Egr-1介导的WNT/β-catenin信号通路有关。