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目的:涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma，SACC）是最常见的涎腺恶性肿瘤之一。因其浸润性强和易发生远处转移而严重危害人类健康，因此探索新的预防治疗方法，提高对涎腺腺样囊性癌的疗效，是广大学者研究的热点问题。 多被银莲花(Anemone Raddeana Regel)是毛茛科银莲花属植物的根茎。药理活性研究发现，多被银莲花提取物有抗肿瘤、镇痛、镇静及抗惊厥作用。我们前期的实验结果表明，多被银莲花总皂甙能够抑制人涎腺腺样囊性癌高肺转移细胞(Adenoid cystic carcinoma of high pulmonarymetastatic，ACC-M)的增殖，并能够诱导其凋亡。目前Bcl-2家族成员Bcl-2及Bax蛋白在多被银莲花总皂甙诱导ACC-M细胞凋亡的过程中是否起重要作用，尚未见国内外文献报导。本研究拟对体外培养的ACC-M细胞经过多被银莲花总皂甙处理后，通过Western Blot方法，检测Bcl-2和Bax不同时间点的含量，来验证多被银莲花总皂甙诱导ACC-M凋亡过程中Bcl-2家族成员Bcl-2和Bax蛋白的表达及意义，从而为治疗腺样囊性癌植物性化学新药的研究提供实验依据。 方法: 1、材料 1.1 ACC-M 北京大学口腔医院提供，建立于1995年。 1.2多被银莲花总皂甙 购买于石家庄乐仁堂药店（产地为黑龙江省），于河北医科大学药学院经溶解与溶剂萃取提纯得到。 2、实验方法 2.1药液制备 多被银莲花总皂甙用DMSO溶解制备成20mg/mL储存液，于-20℃冰箱中保存，使用时用DMSO浓度小于0.001％的培养液稀释。 2.2细胞培养 将10％胎牛血清和链霉素(100ug/mL)、青霉素(100U/mL)放入RPMI1640培养基，置于37℃、5％C02、湿度饱和的恒温箱内培养，每24～48小时传1代，用0.04％EDTA和0.25％胰蛋白酶(1∶1)混合液消化并传代。 2.3细胞接种以及药物处理 用消化液将处于对数生长期的细胞消化后制成4.0×106个/mL的细胞悬液，再将对照组、24h组、48h组、72h组，共四个培养瓶中分别接种2mL细胞悬液，存放于培养箱。经过24小时细胞贴壁后，再进行药物处理。把20mg/mL的多被银莲花总皂甙储存液稀释成浓度为50ug/mL的溶液，从培养箱中取出贴壁后的细胞，把培养液丢弃，于24h，48h，72h各组中分别加入多被银莲花总皂甙溶液2mL（浓度为50ug/mL），对照组加入二甲基亚砜的RPMI1640培养液2mL（浓度为50ug/mL）。待药物作用24、48、72小时后，提取各组细胞组织蛋白。 2.4提取细胞组织蛋白 将每一组细胞用PBS洗涤两次，用消化液消化后制成细胞悬液，移入相应EP管中。3000rmp，4℃，15分钟离心。把上清液吸出，留沉淀，这一次用衡盐溶液洗涤吹打，800rmp，离心5分钟，再次把上清液吸出。往各组中分别加入400uL细胞裂解液，并震荡均匀，放在冰上裂解约30分钟。细胞裂解后离心15分钟(4℃，13000rmp)，结束后，提取上清液就是细胞蛋白，将细胞蛋白分别装入相应的EP管中，置于-80℃冰箱保存。 2.5蛋白的定量 本实验在波长为570nm下使用分光光度法测定测定各样本吸光度值。根据标准曲线拟合样品的蛋白浓度。 2.6采用western blot检测Bax和Bcl-2的表达 经SDS--PAGE（电泳）;转膜;封闭;孵育;洗涤;将β-actin条带作为作为对照，奥德赛扫描成像系统的进行各波段灰度值测定，半定量测定。采用统计学软件对结果进行方差分析。 3、统计分析 实验重复三次，收集所得的实验数据，应用统计学方法分析实验结果。 结果:Western Blot结果显示:经50ug/mL多被银莲花总皂甙处理后，ACC-M细胞中促凋亡Bax蛋白的表达量随着药物作用时间延长而增加，经灰度值分析Bax蛋白的表达量与对照组相比:24h组的蛋白表达量增加了19.6％(P＜0.05)，48h组的蛋白表达量增加了35.9％(P＜0.05)，72h组的蛋白表达量增加了57.2％(P＜0.05)，差异均有统计学意义。同时，Bcl-2蛋白的表达量随药物作用时间延长降低，经灰度值分析Bcl-2蛋白的表达量与对照组相比:24h组的蛋白表达量降低了21.9％（P＜0.05），48h组的蛋白表达量降低了40.0％（P＜0.05），72h组蛋白表达量降低了45.2％(P＜0.05)，均有统计学意义。经统计学分析，随着多被银莲花总皂甙作用时间的延长，Bax/Bcl-2的比值逐渐增大，对照组比值为:0.42±0.009、0.43±0.012、0.43±0.010，无显著性差异(P＞0.05);24小时组比值为:0.64±0.009;48小时组比值为:0.97±0.023;72小时组比值为:1.24±0.042，有显著差异(P＜0.05)。 结论:多被银莲花总皂甙诱导ACC-M细胞凋亡，与其能够通过增加Bax蛋白的表达，同时降低Bcl-2蛋白的表达，导致Bax/Bcl-2蛋白比例增加有关。