论文部分内容阅读
青兰属(Dracocephalum)是唇形科(Lamiaceae)植物的重要成员,大致有60多种,主要分布于北半球温带,有些物种被作为民间药,用于治疗多种疾病,如冠心病、黄疸型肝炎、胃炎、慢性支气管炎和溃疡等。香青兰(Dracocephalmoldavica L.)为该属的一种一年生草本植物。在中国,香青兰主要分布于新疆维吾尔族自治区,对冠心病、高血压和头痛有一定作用。在伊朗,同种植物(名为Moldavian balm)被用于健胃、止吐和发汗。本文首先对香青兰地上全草的化学成分提取工艺进行了优化,确定了合适的提取溶剂(60%乙醇)。之后再选用不同型号的大孔树脂,对香青兰中多酚类化合物进行富集,确定了最适合的大孔树脂型号(DM130),在保证化合物最为集中的同时,除去了色素和糖类等杂质。接下来通过活性跟踪,选择活性最好的大孔树脂40%、60%乙醇洗脱部分进行了系统的化学成分分离。本文采用MCI柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、C18反相硅胶柱色谱以及半制备型HPLC等技术,对上述香青兰提取物大孔树脂色谱的40%和60%乙醇洗脱部分进行了系统分离,共分离得到50个化合物,并采用NMR,MS,UV,IR和CD等多种波谱色谱学技术确定了其结构,包括13个新化合物和37个已知化合物。获得的新化合物包括:3个木脂素类化合物dracomolphin A-C(1-3);1 个新木脂素dracomolphin D(4);5 个3,4-seco-苯丙素类化合物(R)-(+)-dracomolphin E-I(5-9);以及2对木脂素对映异构体(7’R,8’S)-(-)-dracomolphin J(10),(7’S,8’R)-(+)-dracomolphin J(11),(7’S,8’S)-(-)-dracomolphin J(12),(7’R,8’R)-(+)-dracomolphin J(13)。化合物10-13通过手性HPLC成功拆分,化合物5,6,8-13通过CD和旋光数据确定了立体构型。获得的已知化合物共37个,包括15个黄酮类成分:tilianin(14),cosmosiin(15),cymaroside(16),diosmetin-7-O-β-D-glucoside(17),apigenin-7-O-β-D-glucuronide methyl ester(18),acacetin-7-O-ββ-D-glucuronide methyl ester(19),diosmetin-7-O-β-D-glucuronide methyl ester(20),Iuteolin-7-O-β-D-glucuronide methyl ester(21),acacetin-7-O-ββ-D-glucuronide(22),acacetin(23),apigenin(24),circimaritin(25),kumatakenin(26),santaflavone(27),xanthomicrol(28);13 个苯丙素类化合物:methyl(Z)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-{2-methoxy-4[(E)-3-methoxy-3-oxoprop-1-enyl]phenoxy}-prop-2-enoate(29),3-benzofurancarboxylic acid-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxy-5-(3-methoxy-3-oxo-l-propenyl)-methyl ester(30),methyl(E)-3-[2-(3,4-dihydroxyhenyl)-7-hydroxy-3-methoxycarbonyl-2,3-dihydro-1-benzofuran-5-yl]prop-2-enoate(31),(R)-(+)-oresbiusin B(32),(R)-(+)-rosmarinic acid methyl ester(33),(R)-(+)-rosmarinic acid ethyl ester(34),d-pinoresinol(35),epi-pinoresinol(36),eugenol(37),caffeic acid methyl ester(38),ferulic acid methyl ester(39),(R)-(+)-oresbiusin A(40),scopoletin(41);3个萜类化合物:ursolic acid(42),2α-hydroxy-ursolic acid(43),oleanic acid(44);1 个甾体化合物:β-sitosterol(45);5个芳香族化合物:3-methoxy-4-hydroxyanisole(46),syringaldehyde(47),methyl protocatechuate(48),4-hydroxybenzoic acid methyl ester(49),3,4-dihydroxyphenylacetic acid methyl ester(50)。核因子E2相关因子(Nrf2)是一种调节细胞氧化还原平衡的转录因子,主要调控II相解毒酶和抗氧化酶的表达,从而保护细胞免受外界毒物以及自由基的侵袭。诱导Nrf2的表达对多种慢性疾病如糖尿病、心血管疾病、神经退行性疾病均有一定帮助。我们对分离得到的化合物采用稳定转染了荧光素酶的HEK 293细胞,进行了潜在Nrf2激动剂活性筛选,结果表明化合物5,6,8,9,14,15,16,32,38有较好的潜在诱导Nrf2表达的作用。化合物5,6,8,9通过Western blot和免疫荧光实验进一步其探究作用机制,表明这类化合物是潜在的Nrf2诱导剂。化合物30的肿瘤细胞增殖抑制作用筛选结果表明,其作用于NCI-H292细胞的IC50值为4.33 μM,表现出较好的抑制肺癌细胞增殖作用。