沙门菌是最重要的食源性致病菌之一,能够引起人和动物发热、肠炎、败血症等多种疾病。食物链中污染了沙门菌会带来高昂的医疗费用并且会导致生产力的降低,具有重要的经济影响。人类主要由于食用了污染的食物,尤其是动物源性食品或者与患病动物直接接触而感染发病。近几年来,由于抗生素在人和食源性动物上大量使用和滥用,沙门菌的耐药率正逐渐提高。已有大量的文献报道表明,从不同来源分离到的单重和多重耐药沙门菌逐年增加,而且许多沙门菌的血清型中均出现了多重耐药现象。这些耐药的沙门菌能够通过食物链传递至人类,从而造成严重的公共卫生问题。细菌耐药是由耐药基因调控的。已知的许多耐药基因大多位于可移动元件如质粒、转座子、整合子和基因岛上。在抗生素选择性压力的作用下,细菌能够通过可移动元件获得耐药基因,或者某些基因发生突变从而对抗生素产生耐药性。多重耐药细菌往往携带诸如整合子等基因元件。整合子位于质粒、转座子和基因组上,它们可以整合并且传播大量的耐药基因。Ⅰ类整合子是最常见的整合子,研究表明,在世界上许多国家的多种沙门菌血清型中均能检测到Ⅰ类整合子。其主要由3部分组成,两端为高度保守片段,即5’CS和3’CS,中间的可变区为含有一个或多个耐药基因的基因盒,但是有的Ⅰ类整合子不存在基因盒。细菌外排泵系统能够通过膜通道蛋白外排多种抗菌药物,在细菌耐药性方面具有重要的作用。近年来的研究表明,除了在细菌耐药性上发挥作用外,外排泵系统和许多细菌的毒力有关。AcrAB外排泵系统是国内外学者研究较多的外排泵系统,沙门菌AcrAB外排泵系统和细菌多重耐药及致病性有关。近来的研究显示,macAB外排泵系统介导鼠伤寒沙门菌对红霉素的耐药性。而进一步的研究表明,与其它外排泵分子的缺失株相比,macAB基因的缺失对鼠伤寒沙门菌的减毒作用最强。因此,有必要对肠炎沙门菌rnacAB外排泵系统在细菌耐药和毒力方面的作用机制进行研究。1不同来源肠道沙门菌分离株流行病学分析2009-2010年间,采集华东地区鸡源、鸭源、鹅源、猪源和人源样品2566份,共分离到135株沙门菌,样品阳性率为5.3%。135株沙门菌包括10种不同的血清型,常见血清型依次为山夫登堡沙门菌、肠炎沙门菌、鸡白痢沙门菌和鼠伤寒沙门菌。应用XbaⅠ对所有分离株进行PFGE分型分析,135株沙门菌共分为A-F6个遗传谱系和47个PFGE带型,相似度在36-100%之间。除了山夫登堡沙门菌、德尔卑沙门菌和圣保罗沙门菌外,PFGE带型均按照血清型进行遗传谱系的划分。有些分离于不同区域和不同动物种类的纽波特沙门菌相似度也非常高。PFGE结果表明,华东地区不同区域、不同源沙门菌和不同血清型沙门菌的PFGE带型较复杂。对135株沙门菌分离株进行了18种抗生素药敏分析、17种耐药基因和Ⅰ类整合子的检测。药敏试验的结果表明,菌株对羧苄西林、萘啶酸、磺胺异噫唑、氨苄西林和阿莫西林的耐药率最高,分别为94.1%、45.2%、37%、31.9%和28.9%,菌株对环丙沙星均敏感。总共有131(97%)株菌株至少对1种抗生素耐药。135株菌株共有32种不同的耐药谱。鸡源沙门菌和鸡白痢沙门菌多重耐药现象严重,多数对5种及以上抗生素耐药。耐药基因的检测结果表明,blatem-1、blapse-1、Sul2和tetA阳性率最高,分别为89.6%、55.6%、28.15%和20.7%,没有检测到blaCMY-2、blaCMY-9、tetC、tetG和floR。除了氨基糖苷类外,其它种类抗生素耐药表型的测定结果与耐药基因基本一致。135株细菌中有17株携带Ⅰ类整合子,阳性率为12.6%。含有Ⅰ类整合子菌株的血清型包括山夫登堡沙门菌、德尔卑沙门菌、鸡白痢沙门菌和肠炎沙门菌。所有含有Ⅰ类整合子的菌株均携带int1(?)qacEΔ1-sul(?)基因,其中有10株(7.4%)菌株含有大小为1kb的整合子,其基因盒所含基因为aadA2,含有大小为600bp整合子的菌株不携带基因盒。另外,没有在同一株菌株中发现有2种不同的Ⅰ类整合子。2肠炎沙门菌macAB外排泵系统功能初步研究以肠炎沙门菌人源分离株P04基因组为模板,PCR扩增macAB基因的上下游同源臂,同时以质粒pKD3为模板扩增氯霉素耐药基因Cm。将这3个基因亚克隆至自杀性载体pGMB151,构建重组自杀性载体pGMB151-ΔmacAB/Cm。通过重组自杀性载体pGMB151-ΔmacAB/Cm突变的macAB基因和肠炎沙门菌PO4基因组上野生型macAB基因发生同源重组,成功构建PO4ΔmacAB缺失株。同时利用PCR方法对突变株进行鉴定。突变株的血清型、生化特性及药敏分析结果和亲本株均一致,而生长速度稍慢于亲本株,但是差异不明显。LD50结果表明,突变株的毒力较野生株下降了3.6倍。这些结果表明肠炎沙门菌外排泵系统macAB和其毒力有关。