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本文用包括甜、辣椒在内的共25个基因型为试验材料,对基因型,培养条件,培养基成分等影响花药培养的一系列重要因素做了研究和探讨。对小孢子培养中获得干净高活力小孢子的方法,小孢子培养的基本培养基的选择,诱导小孢子脱分化的各种条件等进行了初步的探索。 小孢子发育时期与花蕾外部形态有对应关系。瓣萼比可以作为实验中的一个取蕾标准。当瓣萼比在1左右时,大部分花蕾小孢子处在单核靠边期。不同材料之间这种关系存在一定差异。 基因型是影响花药培养最重要的因素。在25个供试基因型中8个有胚状体发生,其中A16、A17、A18母本相同,A17和A21父本相同。在本实验所用的激素及其浓度范围内,不同基因型的最适激素浓度不同。高浓度的激素对出胚率较高的基因型A14、A17、A18有缩短出胚时间的作用,同时可以刺激在低浓度时不出胚的基因型A45、A47出胚。愈伤组织的形成与基因型有关,基因型A14在花药培养中极易愈伤化。培养基中添加适当浓度(0.2%-0.5%)的活性炭对花药培养有利,它可以促进胚状体的诱导,减轻花药培养中愈伤组织发生和花药褐化程度。花药培养前期高温处理有利于胚状体的诱导,不同基因型的最适高温处理温度不同。A17的最适温度是32℃,A18的最适温度是29℃。前期的光培养和常温暗培养不利于胚状体的诱导。 不同基因型小孢子鲜活力不同,同一基因型在不同的生长时期小孢子活力不同,不同的基因型在不同的生长时期小孢子的活力变化也不相同。在花药培养中出胚率相对高的基因型,花药内小孢子活力也要相对高一些。 用横剖花药后挤压的方法游离小孢子或花药预培养自然游离小孢子,第一次低转速(300转/分)离心是一种得到干净和高活力小孢子的可行办法。PM培养基使小孢子活力下降太快,不适合做辣椒的小孢子培养。在MS,NLN,SNGM三种培养基中都可以观察到小孢子的膨大,分裂,在MS上还观察到了类胚。这三种培养基都有利于小孢子的脱分化。 高温预处理对小孢子脱分化影响显著。35℃和32℃不超过24小时的高温培养对小孢子脱分化有利。低温和甘露醇预处理都有利于保持小孢子的活力。在花药预培养中,摇动培养有利于小孢子尽快从花药中散出,同时花药预培养可能有利于愈伤组织的形成,供试的6个基因型中,A45和A46都有愈伤组织出现。