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葡萄白粉菌(Erysiphe necator)是严重危害葡萄生产的重要真菌之一。世界范围内广泛栽培的欧洲葡萄均不抗病,因此,对欧洲葡萄进行定向转基因改良以提高其抗病性成为葡萄抗病育种的重要方向。本研究以感病葡萄无核白体细胞胚为转基因受体材料,将拟南芥广谱抗病基因RPW8.2转化到无核白葡萄中,并检测了RPW8.2基因在转基因葡萄中的表达。具体内容及取得的结果如下:1.诱导得到无核白葡萄胚性愈伤组织。以无核白葡萄的花药和小花蕾为外植体,用PIV培养基(MS+30 g/L蔗糖+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L 6-BA+0.1 g/L肌醇+7 g/L琼脂)培养得到胚性愈伤组织,进而萌发为成熟体细胞胚;体细胞胚在二次诱导培养基KBN(MS+30 g/L蔗糖+1 g/L肌醇+0.3 g/L KNO3+1.126 mg/L 6-BA+0.552 mg/L2,4-D+0.5505 mg/L NOA+3 g/L植物凝胶)上培养得到胚性愈伤组织。对诱导的愈伤组织用改良苯酚品红染色,结果表明,胚性愈伤组织细胞致密染色较深,非胚性愈伤组织细胞疏松染色较浅。2.获得了无核白葡萄RPW8.2转基因株系。采用农杆菌介导法,将携带RPW8.2基因自身启动子和35S启动子载体,转入无核白葡萄胚性愈伤组织。转化过程中,液体KBN为共培养培养基时,在筛选培养基上培养4周,产生次生胚率为93.7%,1/2 MS(MS+30 g/L蔗糖)为共培养培养基时,产生次生胚率为4.7%。对抗性株系进行PCR和Western Blot检测,结果表明,RPW8.2基因被整合到无核白葡萄中,获得自身启动子转基因株系80株,35S启动子转基因株系24株。3.抗性胚在成苗培养基(MS+0.2 mg/L 6-BA)培养,自身启动子植株生长速度较慢,生根率只有8.8%,而组成型启动子植株均不能存活;在生根培养基上(MS+IBA)培养,当IBA浓度为1.0 mg/L时,自身启动子植株生根率可达100%,而组成型启动子植株率为54.2%。4.无核白葡萄RPW8.2转基因株系增强了对白粉菌的抗性。RPW8.2在转基因株系中受白粉菌诱导表达,转基因植株病原菌菌丝生长受到抑制,白粉菌吸器畸形,有H2O2积累;此外,5 mM SA也能诱导RPW8.2基因在转基因葡萄中表达。