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【背景】在儿童和青少年人群中最常见的恶性骨肿瘤是骨肉瘤,骨肉瘤具有增殖速度快,易耐药的特点,使得骨肉瘤在临床上的死亡率和致残率都很高。微小RNA(microRNA,miRNA)是肿瘤分子生物学研究领域的热点,在肿瘤的发生发展过程中有着举足轻重的作用。现研究发现血清/血浆中存在上百种miRNA,这些miRNA与一些肿瘤疾病特异性存在一定联系,因此在肿瘤的诊断、治疗及预后监测方面有一定的应用价值。近期研究表明,miRNA在肿瘤的发生、发展和转移过程中起重要作用。本实验以miRNA-638为研究对象,观察其在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞系MG63及U2OS增殖的影响。【目的】通过观察miRNA-638(MicroRNA-638)对人骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞增殖带来的变化,探讨miRNA-638在骨肉瘤细胞增殖行为中的作用。【方法】(1)用64对骨肉瘤组织和癌旁组织,以及骨肉瘤MG63、U2OS、HOS、SaOS2细胞株中和正常人成骨NHOst细胞株作为研究对象,通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miRNA-638在上述组织和细胞中的表达。(2)使用LipofectamineTM2000转染miRNA-638 mimic或inhibitor,达到上调或下调mg63及u2os细胞内mirna-638的效果。(3)使用cck-8分别检测转染24h、48h、72h、96h后的吸光光度值。(4)使用平板克隆形成实验检测培养2周后在倒置显微镜计数超过30个细胞的菌落。【结果】(1)mirna-638在人骨肉瘤组织、癌旁组织、多种骨肉瘤细胞株中及正常人成骨细胞株中的表达:用实时定量聚合酶链反应的方法检查出64组骨肉瘤组织中成熟的mirna-638的表达水平。结果显示与配对的癌旁组织相比有36组(56.25%)骨肉瘤组织中mirna-638的表达是下调的(p<0.001)。实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测骨肉瘤mg63、u2os、hos、saos2细胞株和nhost细胞株中的mirna-638的表达水平,结果提示在骨肉瘤细胞株中mir-638的表达明显下调(p<0.05)。(2)cck-8与平板克隆形成实验:cck-8实验显示了mirna-638能抑制骨肉瘤mg63和u2os细胞的增殖(p<0.05),相反,抑制mirna-638表达显著促进了mg63和u2os细胞的生长(p<0.05)。平板克隆形成实验也证实了mirna-638的高表达能显著降低mg63和u2os细胞的生长率(p<0.05)。【结论】(1)mirna-638在人骨肉瘤组织及骨肉瘤mg63、u2os、hos、saos2细胞株中的表达下调。(2)miRNA-638高表达能抑制人骨肉瘤细胞的增殖