【摘 要】
：
目的:白屈菜红碱（chelerythrine,CHE）又名白屈菜赤碱、白屈菜季铵碱,是中药白屈菜的有效成分。CHE具有抗肿瘤、抗菌、抗炎等药理活性,特别是CHE具有抑制多种肿瘤细胞生长及诱导凋亡的作用,但对于体内抗肿瘤研究较少,且通过制剂手段降低该药物毒性未见报道。因此,本论文拟初步研究CHE体外抗肿瘤药效与机制,构建、表征CHE脂质体并评价其体内药效及药动学行为,探索CHE脂质体减毒及增效作用,
论文部分内容阅读
目的:白屈菜红碱（chelerythrine,CHE）又名白屈菜赤碱、白屈菜季铵碱,是中药白屈菜的有效成分。CHE具有抗肿瘤、抗菌、抗炎等药理活性,特别是CHE具有抑制多种肿瘤细胞生长及诱导凋亡的作用,但对于体内抗肿瘤研究较少,且通过制剂手段降低该药物毒性未见报道。因此,本论文拟初步研究CHE体外抗肿瘤药效与机制,构建、表征CHE脂质体并评价其体内药效及药动学行为,探索CHE脂质体减毒及增效作用,为CHE的应用开发提供参考。方法:1.CHE体外抗肿瘤作用研究:采用MTT法、FITC-Annexin V双染法、PI单染法、荧光探针DCFH-DA、JC-1试剂盒、caspase3活性检测试剂盒、western blot实验,分别评价CHE对非小细胞肺癌细胞系HCC827细胞的细胞毒性、凋亡、周期、活性氧（ROS）、线粒体膜电位、caspase3活性、蛋白PKC-ε的影响。2.CHE处方前研究:建立HPLC含量测定方法并进行方法学考察;测定CHE的平衡溶解度、表观油水分配系数,评价CHE基本理化性质。3.白屈菜红碱脂质体（CHELP）处方单因素考察:以载药量为评价指标,通过单因素实验分别考察了脂质材料比例、药脂比、药物孵育p H及孵育时间对CHELP处方的影响。4.CHELP处方优化:以CHOL:HSPC（w/w）、药脂比、药物孵育时间作为考察因素,以粒径和载药量作为考察指标,以星点设计优化CHELP处方。5.CHELP的表征:观察形态,测定粒径、Zeta电位、包封率及载药量;在4°C评价脂质体的稳定性;采用透析法对CHELP进行体外释放研究。6.CHELP药动学初步评价:建立CHE小鼠血浆LC-MS/MS测定方法并进行方法学考察;CHE、CHELP分别按6 mg/kg剂量尾静脉注射给药,定时取点采血进行药动学初步研究。7.CHELP体内抑制肿瘤作用:HCC827非小细胞肺癌肿瘤模型造模后,CHE、CHELP分别按10 mg/kg剂量尾静脉注射给药。以肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、tunel染色、ROS检测、蛋白PKC-ε表达量等为指标初步评价抑瘤作用。通过小鼠体重、脏器系数及HE染色初步评价脂质体制剂的安全性。结果:1.CHE体外细胞实验研究:CHE对非小细胞肺癌细胞系HCC827细胞的半抑制浓度IC50值为15.13±0.93μM;通过介导ROS/PKC-ε/Caspase 3通路诱导HCC827细胞凋亡,细胞周期阻滞在G2/M期,促进ROS增加,降低线粒体膜电位,上调caspase 3活性并抑制蛋白PKC-ε表达。2.CHE处方前研究:CHE的HPLC含量测定方法可行;CHE水溶性好,在水中时Log P值最小为-1.53。3.CHELP处方单因素考察:在辅料CHOL:DSPE-PEG2000:HSPC的比例为1:1:3（w/w）,药脂比为1:4,药物孵育p H值为8.0,药物孵育时间为30 min时,脂质体的载药量最高。4.CHELP处方优化:经星点设计效应面法优化,脂质体的粒径、载药量的回归方程拟合良好,预测最佳工艺因素为CHOL:HSPC为0.87:1（w/w）,药脂比0.21,孵育时间26.54 min。5.CHELP表征:外观澄清均一,平均粒径为126.1±1.9nm,PDI小于0.3;Zeta电位为-40.1±2.2 m V;包封率为83.94±1.72%;载药量为16.67±0.32%;4℃条件下稳定;体外累积释放率小于20%,与CHE相比具有缓释效果。6.药代动力学评价:与CHE相比,CHELP药时曲线下面积AUC0-t为4.349mg/L·h,较CHE增加近15倍;最高血药浓度Cmax增大为19.122 mg/L;清除率CL降低为1.353 L/h/kg;表观分布容积V降低为12.832 L/kg。7.CHELP体内抗肿瘤作用初步评价:CHE和CHELP均有抑瘤作用,其中CHELP治疗组中肿瘤体积与质量个体差异更小,治疗作用均一。在给药干预期间,CHE治疗组内3只动物死亡,其余裸鼠也表现出明显机体损伤,但CHELP治疗组未发生上述情况,脂质体具有提高药物安全性的作用。结论:CHE可能通过介导ROS/PKC-ε/Caspase 3通路诱导非小细胞肺癌细胞系HCC827细胞凋亡,抑制肿瘤细胞生长,体内试验也证明了其抑瘤效果。CHE脂质体制剂具有缓释作用,并在一定程度上能够减轻CHE的毒性反应。
其他文献
目的:疼痛是一种包括感觉、情感和认知三个层面的不愉快的感受。慢性痛患者会伴随着长期不同程度的情绪变化和认知障碍（比如抑郁和焦虑）。慢性痛的缓解或镇痛效应会产生愉悦感,被认为是一种奖赏,能激活大脑的奖赏系统,而改善疼痛相关情绪变化。针刺镇痛的奖赏效应及正性情绪是针刺镇痛中调神畅志作用的重要体现,因此,研究针刺缓解慢性痛的奖赏效应有着重要的临床和科学意义。已有的研究表明前额皮层（主要在前额皮层的腹侧区
目的:在针刺镇痛的动物实验中,首先建立在清醒无束缚大鼠上实施手针针刺的方法,其次探究穴区机械敏感性TRPA1与TRPV4蛋白在针刺镇痛外周机制中的作用。方法:在探索动物预处理方法的实验中,Sprague-Dawley大鼠随机分为（1）空白对照组、（2）疼痛模型组、（3）清醒无束缚治疗组、（4）束缚治疗组、（5）麻醉治疗组,每组6-12只。在探索针刺镇痛穴位机制的实验中,大鼠分为:（1）空白对照组、
目的:通过“以痛为腧”按揉法观察推拿对臂丛神经损伤大鼠的镇痛作用以及与情绪相关的脑内的影响因素,探索推拿对于治疗神经病理性疼痛的脑内效应机制,藉此希望通过从脑科学的角度来阐述推拿手法作用的科学依据,并为临床治疗臂丛神经损伤康复提供新思路。方法:135只SD大鼠,随机取出24只作为空白对照组,其余大鼠制作臂丛神经神经损伤模型,造模成功后分为假手术组、模型对照组、轻手法治疗组、重手法治疗组,每组24只
目的:通过正交试验设计探索（扌衮）法操作（时间、力值和频率）行气活血机制的最佳参数组合,为（扌衮）法临床量效研究提供试验基础。方法:用H-series压力测量系统采集（扌衮）法力值、频率数据,通过IBM SPSS Statistics 21软件设计出3因素3水平正交试验方案。操作者前期先熟悉各组（扌衮）法参数,正式试验时按照各组参数设定进行正交试验,并用激光多普勒探头和红外热像仪记录（扌衮）法前后
目的在本课题组前期研究荷叶碱干预非酒精脂肪性肝炎的实验基础上,通过细胞体外和动物体内实验模型,探讨脂肪性肝损伤模型发生、发展的特点,同时进一步明确荷叶碱对非酒精性脂肪性肝损伤的干预作用,深入探讨其可能的作用机制。方法1、建立FFA诱导Hep G2细胞形成脂肪性肝损伤模型,通过CV法和MTT比色法检测细胞活力,油红O染色观察细胞模型中脂质浸润的情况,Seahorse XF96检测线粒体的呼吸功能,高
目的:观察10.6μm激光灸对氢化可的松所致肾阳虚模型大鼠生长性能的改善作用及其对下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节作用,为临床广泛存在的肾阳虚证提供有效的治疗方法和实验依据。方法:选取雄性SD大鼠50只随机抽取10只作为空白对照组,剩余40只作为氢化可的松模型组,实验开始即对40只模型大鼠进行氢化可的松注射液内侧股二头肌肌注,剂量25 mg/kg,左右交替连续注射15天。空白对照组采取相同的方法注射等
目的:通过检索Sinomed、CNKI、维普、万方数据库中,1949-2020年相关文献,对中医传统功法防治高血压病的文献回顾。并通过问卷及访谈的方式,调查传统功法在司法戒毒系统中的运用与推广现状。在文献研究和调研基础上,观察三线放松功对合成毒品成瘾并发高血压人员的身心健康的影响。以期形成对合成毒品成瘾安全有效的康复运动方案,并在戒毒康复系统中进行推广应用。方法:1.文献整理研究:全面、系统搜集、
目的:基于超高效液质联用技术（UPLC-MS）技术,分析菊三七水煎剂灌胃大鼠的血清内源性代谢物,并进一步深入研究菊三七致大鼠肝脏损伤对血清胆汁酸代谢的影响,为后续应用UPLC-MS技术进行相关体内代谢物检测提供参考与支持,同时为研究菊三七毒性机制奠定基础,为临床早期诊断提供一定的依据。方法:1.应用超高效液相色谱与线性阱-静电场轨道离子阱质谱联用（UPLC-LTQ-Orbitrap MS）技术,对
1目的本研究以经典名方葛根芩连汤为研究对象,采用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术快速分析鉴定葛根芩连汤中化学成分和入血成分,系统地阐明葛根芩连汤的药效物质基础;进一步运用网络药理学的方法,探究葛根芩连汤治疗急性肠炎的作用机制,包括揭示其关键成分、靶点和调节的通路等;最后建立葡聚糖硫酸钠诱导的急性肠炎大鼠模型,筛选预测的关键成分,对其药效和作用机制进行实验验证。希冀能为葛根芩根芩连汤的物
目的:进行具有二氧化硫特异性响应的荧光探针设计,并研究其与二氧化硫特异性反应后,荧光、紫外-可见光谱的变化特征,建立适合于中药材中二氧化硫残留的定性检测、定量测定方法,并将其用于动物机体内亚硫酸根离子的荧光成像检测。方法:（1）通过羟醛缩合反应合成基于肉桂醛荧光母核的荧光探针I和基于半花菁荧光母核的荧光探针Ⅱ。（2）考察荧光探针I和Ⅱ在水溶液中与SO32-反应后的紫外-可见光吸收以及荧光图谱变化,