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目的;观察结合于Bcl-xlmRNA上低自由能区域的反义寡核苷酸对Bcl-xl基因的抑制效应,以及对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞体外增殖和凋亡的影响
方法;基于最小自由能算法分析出Bcl-xlmRNA上的低结合自由能区域,并针对这一区域合成反义核酸As587;转染高表达Bcl-xl的人乳腺癌细胞系MCF-7;倒置显微镜及透射电子显微镜下观察细胞形态学改变;MTT法测定细胞增殖抑制率,RT-PCR检测Bcl-xlmRNA水平;免疫细胞化学方法检测Bcl-xl蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期及凋亡发生率。
结果;1.MCF-7细胞增殖受抑,且抑制效应与寡核苷酸浓度、作用时间呈量效及时效关系
2.Bcl-xlmRNA及蛋白表达水平下降,细胞出现凋亡
结论;1.As587能抑制Bcl-xl基因的表达,在体外能抑制乳腺癌细胞增殖
2.对于较短的mRNA,利用最小自由能原理对其设计反义核酸是一种可以信赖的方法,以此方法设计的反义核酸As587在体外对Bcl-xl基因表现出了较为高效的抑制作用