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猪圆环病毒2型(PCV2)是临床中诱发断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原，常与猪细小病毒1型(PPV1)发生混合感染而导致更为严重的PMWS临床症状和组织病理损伤，给世界养猪业带来了巨大的经济损失。近年来，国内关于PCV2与PPV1混合感染的报道较多，引起了广泛关注。通过对临床中PPV1、新型猪细小病毒(PPV2、PPV3、PPV4)与PCV2的混合感染情况进行了流行病学调查，对其流行毒株进行了遗传变异分析，为我国PPVs和PCV2的综合防治提供科学依据。鉴于我国猪群中二者存在混合感染现象，因而开发针对PCV2和PPV1的二联亚单位疫苗具有重要的临床应用价值。PCV2-Cap蛋白和PPV1-VP2蛋白分别是PCV2和PPV1的主要结构蛋白，在诱导机体特异性免疫反应中发挥重要作用，是亚单位疫苗制备的重要候选抗原。本研究以杆状病毒系统表达PPV1-VP2蛋白制备单克隆抗体，为亚单位疫苗制备中VP2蛋白的表达提供检测手段;采用杆状病毒双表达系统共表达PPV1-VP2蛋白与PCV2-Cap蛋白，经动物免疫试验鉴定其免疫原性，为亚单位疫苗的研制提供了技术支撑。 为了解新型猪细小病毒(PPV2、PPV3和PPV4)与PMWS发生之间的关系，本研究对疑似PCVAD病料进行了PPV1、PPV2、PPV3、PPV4与PCV2的混合感染调查及分子流行病学分析，为PMWS的致病机理的研究提供新的思路。流行病学调查表明，PPVs与PCV2单独感染阳性检测率分别为:5.56％(PPV1)、39.56％(PPV2)、45.11％(PPV3)、21.56％(PPV4)和47.33％(PCV2);PPVs与PCV2的混合感染阳性检测率分别为:4％(PPV1+PCV2)、22.44％(PPV2+PCV2)、24％(PPV3+PCV2)和12％(PPV4+PCV2)。选取其中PPVs和PCV2阳性样品对病毒主要结构蛋白编码基因进行了遗传进化分析与氨基酸序列比对。结果表明，PPVs与PCV2在遗传进化上主要形成2大分支;通过氨基酸序列比对分析找到了一些可能影响PPVs与PCV2遗传进化的关键氨基酸位点。鉴于新型PPVs与PCV2混合感染情况较为严重，因而推测二者在PMWS的发生中起到了相互促进作用，这为PMWS疾病模型的研究提供一定线索。 为了建立PPV1抗原检测方法，以重组杆状病毒表达PPV1-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠，融合后采用IPMA方法筛选获得了8株针对PPV1-VP2蛋白的单克隆抗体。结果表明，所制备的单抗均可与PPV1感染的ST细胞呈阳性反应且可以与自然PPV1-VP2蛋白产生良好的免疫反应。为了鉴定这些单抗所针对的抗原表位，我们将PPV1-VP2蛋白依次进行了分段截短表达与两端截短表达，并通过间接ELISA的方法来扫描多肽与单抗的反应特性，从而确定单抗表位的最短核心序列。结果表明，这8株单抗总共针对3个VP2表位，分别为B5-E1(228QQITDA233)、B10-E2(284RSLGLPpK291)与B15-E3(344FEYSNGGPFLTPI356)。PPV1-VP2氨基酸序列比对结果表明，B10-E2与B15-E3在29条比对序列中完全保守，而B5-E1在233位氨基酸发生碱基替换。以其中1株单抗(8E4)作为检测抗体，通过间接ELISA方法，对重组杆状病毒表达的PPV1-VP2蛋白产物进行的动力学检测表明，重组杆状病毒感染后72 h蛋白表达量最高:利用单抗8E4对PPV1感染细胞规律的测定结果显示，接种后16h可以检测到病毒感染的阳性细胞;以8E4为检测抗体对PPV1-VP2蛋白的亚细胞定位进行观察，结果显示，感染后24 h病毒颗粒组装完成并进入细胞质。本研究成功制备了针对PPV1-VP2蛋白的单克隆抗体，鉴定了其表位核心序列，并建立了针对VP2蛋白抗原及病毒繁殖规律的检测方法，为亚单位疫苗的研制及PPV1感染机制的研究奠定了基础。 为了验证共表达PPV1-VP2与PCV2-Cap蛋白的免疫原性，以杆状病毒表达系统共表达PPV1-VP2和PCV2-Cap蛋白并以各自的单表达产物作为对照。SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示，PPV1-VP2蛋白与PCV2-Cap蛋白均得到表达，且与PPV1和PCV2的抗体产生良好的免疫反应。用共表达PPV1-VP2与PCV2-Cap蛋白及及各自单表达蛋白制备4种亚单位疫苗:PPV1-VP2/PCV2-Cap共表达疫苗组、PCV2-Cap+PPV1-VP2单苗混合组、PPV1-VP2单苗组、PCV2-Cap单苗组，经肌肉注射途径分别免疫BALB/c小鼠和豚鼠测定免疫动物血清抗体鉴定它们的免疫原性，同设商品化PCV2灭活苗和PPV1灭活苗阳性对照组及PBS阴性对照组。对4种亚单位疫苗免疫小鼠血清抗体测定结果显示，PPV1抗体效价平均值均可达到1∶3200;PCV2抗体效价分别为1∶3200、1∶12800与1∶12800。豚鼠免疫试验血清中PPV1抗体效价平均值分别为1∶1600、1∶800与1∶800; PCV2特异性抗体效价平均值分别为1∶3200、1∶6400与1∶6400。本研究证实共表达PPV1-VP2/PCV2-Cap疫苗免疫组在二免后能够诱导机体产生与PCV2-Cap+PPV1-VP2单苗混合组、PPV1-VP2单苗组及PCV2-Cap单苗组相当的PPV1和PCV2特异性抗体水平，这为PPV1和PCV2二价亚单位疫苗的研究提供一定的技术基础。