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呼肠孤病毒(Reo virus)是一种dsRNA病毒,具有广泛的宿主谱。医学生物学研究所树鼩种质资源中心在开展实验树鼩(Tree Shrews)的种群繁育过程中,曾先后发现野外引进的树鼩中出现了类似病毒感染的临床症状、甚至死亡的现象。利用细胞培养法进行病毒分离,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,电镜观察,鉴定为树鼩呼肠孤病毒(TRV),共分离得到3株,暂命名为TRV1、TRV2和TRV3。证实树鼩是呼肠孤病毒的感染宿主,本论文对新分离的TRV建立了定性、定量核酸检测方法,并进行了致病性研究。首先,为探索TRV在树鼩种群中的感染率,本论文建立了TRV的RT-nPCR(巢式PCR)检测方法。根据GenBank中已发表的呼肠孤病毒L1基因的保守区域,设计合成巢式引物,对所分离的TRV1、TRV2和TRV3的RNA进行RT-nPCR扩增,优化反应条件,进行特异性、敏感性试验。结果显示该方法特异、敏感、稳定,可应用于TRV的快速定性检测。应用建立的RT-nPCR方法对野外引进的成年发病树鼩、离乳树鼩和乳树鼩进行TRV携带率的检测。结果发现成年发病树鼩中TRV检出率为76%(19/25只)；正常离乳树鼩TRV检出率10%(1/10只)；正常乳树鼩TRV检出率20%(2/10只)。TRV在树鼩种群中具有较高的检出率。在进行病毒体外培养中,发现TRV导致的Vero细胞病变(CPE)随代次的升高逐渐变弱,病毒滴度仅为102.5TCID50/mL。为制备较高滴度的病毒液,于细胞培养液中加入终浓度10μg/mL的糜蛋白酶CHT,结果显示CHT可促进TRV对Vero细胞的感染,TRV的病毒滴度提高至108.3TCID50/mL,为开展TRV的研究提供了病毒来源。其次,为实现TRV核酸拷贝数的定量检测,本论文建立了TRV的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,标准曲线显示Ct值和模板起始浓度的log值之间具有较好的线性关系,重复性良好,可用于TRV的定量检测。为研究TRV对实验树鼩的致病性,本论文分别对乳鼠脑内注射组、乳树鼩脑内注射组和乳树鼩口服组,接种108.3TCID50/mL TRV2病毒液,观察树鼩病理变化和病毒复制与分布。于感染后不同时间处死动物,剖检观察解剖学改变；采集组织脏器,HE染色观察组织病理学变化；TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测各组织病毒载量。结果显示：①乳树鼩脑内注射TRV2后第1、3、6、8天,在脑、肝、肺、肠组织均可检测到病毒核酸的存在,脑组织中的病毒拷贝数随感染天数而上升,在第8天达到高峰(2.55×109copies/mg),病理学显示出现了脑炎、间质性肺炎；②乳树鼩口服TRV2后第3、7、14、21、28天,在脑、心、肝、脾、肺、。肾组织均不同程度的检测到病毒核酸,病理学显示重度间质性肺炎改变；③乳鼠脑内注射TRV2后的感染情况与乳树鼩的结果基本一致,在第6天达4×107copies/mg。结果进一步提示,树鼩呼肠孤病毒能感染免疫功能不全的乳树铜,108.3TCID50/ml的感染量都未能致动物死亡,但在脑、心、肝、脾、肺、肾组织均能复制,并造成这些器官的损伤,其中对脑和肺部损伤较为严重,具有一定致病性。本论文的研究结果为将来开展树鼩呼肠孤病毒感染模型奠定了基础；同时,树鼩呼肠孤病毒的致病机理,以及是否与其它病毒合并感染,这些问题将在今后的工作中进一步阐明。