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目的:1.研究建立杜仲药材主要有效成分的含量测定方法,对不同生长年限,不同采收时间,不同部位,不同加工、储藏方法杜仲药材中主要有效成分的含量进行测定,探明杜仲药材不同采收时间、不同加工、储藏过程对其主要有效成分的影响,为规范杜仲药材的采收、初加工及储藏过程提供科学依据。 2.研究探讨近红外漫反射法用于杜仲药材主要有效成分含量测定的可行性,为建立更为简便快速的含量测定方法提供依据。 方法:1.采用高效液相色谱法,以杜仲中主要有效成分松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷和绿原酸的含量为考察指标,测定杜仲中主要有效成分的含量。松脂醇二葡萄糖苷色谱条件为:流动相:甲醇-水(25:75),检测波长:277nm,进样量:10μl,流速1mL/min,柱温:25℃;桃叶珊瑚苷色谱条件为:流动相:甲醇–水(10:90),检测波长:203 nm,进样量:10μL,流速1 mL/min,柱温:25℃;绿原酸色谱条件为:流动相:乙腈-0.4%磷酸(13:87),检测波长:327 nm,进样量:20μl,流速1 mL/min,柱温:25℃。 2.用近红外漫反射法技术测定杜仲药材内皮粉末的近红外光谱。经对光谱进行一阶导数和减去一条直线相结合处理后,利用7502~4597.6 cm-1范围区间内提取得到的光谱信息,用于测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量。 结果:1.建立了杜仲中三种主要有效成分含量测定的方法。 2.不同生长年限杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷及绿原酸的含量测定结果表明,杜仲基本上以生长期在13-22年间,其皮中主要有效成分含量为最高。不同部位杜仲中松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷、绿原酸的含量测定结果表明,杜仲皮、叶、枝中均含有绿原酸,且以叶中含量最高;其他两个成分则在杜仲内皮中含量最高。 3.不同储藏方法对杜仲中主要有效成分的含量变化研究结果表明,以纸箱储藏为杜仲最好的存放方式。对于储藏时间,最好不要超过6个月,特别是桃叶珊瑚苷和绿原酸两种成分,在存放6个月之后,含量降低得非常严重。 4.建立了近红外光谱技术快速测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的方法。选取了三个不同产地的41个杜仲样品,用高效液相色谱法测定其松脂醇二葡萄糖苷含量,用近红外光谱仪漫反射方式在12000~4000 cm-1范围内采集相应样品的光谱,利用仪器自带的OPUS软件优选了光谱的预处理方法,并用偏最小二乘法(PLS)建立松脂醇二葡萄糖苷含量和光谱数据之间的相关性模型。结果表明,对光谱进行一阶导数和减去一条直线相结合处理后,在7502~4597.6 cm-1范围区间内能最有效地提取光谱中的信息,经交叉验证后校正集相关系数(r2)为0.9264,校正集标准偏差(SEC)为0.029,预测集标准偏差(SEP)为0.026。说明杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量和近红外光谱之间存在良好的相关性,适合于此中药指标性成分的快速分析。 结论:本研究确定了杜仲药材最佳的采收期、初加工方法及储藏方式,为杜仲药材的合理利用提供了科学依据。本实验研究结果对于揭示杜仲药材采收、初加工、储藏的科学内涵,确保杜仲药材的质量,保证其疗效具有重要的意义。本研究还建立了近红外光谱法测定松脂醇二葡萄糖苷含量的方法,此方法简便、快捷、成本低,可用于杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷的快速分析。本课题对杜仲的发汗进行了研究,发现杜仲经―发汗‖后,其代表性有效成分松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷及绿原酸的含量均有下降趋势,尤其是绿原酸的含量明显降低。杜仲要经“发汗”后入药的科学内涵,有待进一步研究。