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本研究建立了马杜霉素在鸡组织(肌肉、肝脏、“皮肤+脂肪”)中的HPLC-FLD检测方法,探讨了马杜霉素在鸡组织中的消除规律,旨在为合理用药、保障食品安全提供科学依据。
组织样品经异辛烷(“皮肤+脂肪”经乙腈)提取,florisil(硅镁)固相萃取小柱净化,在酸性环境中用0.75%丹磺酰肼溶液柱前衍生,浓缩后乙腈定容,上机测定。高效液相色谱分析条件:色谱柱为Supeleo C18柱;流动相为:乙腈:0.7mM硫酸氢化四丁铵溶液(85/15,v/v),流速为1mL/min:荧光检测,激发波长为260nm,发射波长为510nm;进样量:20μL。
标准曲线在0.15~7.2μg/mL范围内相关系数大于0.9990,线性关系良好。在0.03mg/kg、1/2MRL、MRL、2MRL四个添加水平条件下,肌肉的回收率为71.42%~92.78%,平均回收率为83.30%,批内变异系数为4.55%~8.47%,批间变异系数为4.78%~7.40%;肝脏回收率为71.42%~97.14%,平均回收率为82.81%,批内变异系数为2.81%~13.11%,批间变异系数为4.65%~11.27%;“皮肤+脂肪”回收率为72.43%~100%,平均回收率为82.42%,批内变异系数为1.41%~12.67%,批间变异系数为4.47%~8.52%。检测限为0.01mg/kg,定量限为0.03mg/kg。结果表明本检测方法灵敏、准确,符合马杜霉素残留检测的要求。
选取36只30日龄岭南黄肉鸡,公母各半。其中,空白对照6只,其余30只以含马杜霉素5mg/kg的临床推荐剂量拌料饲喂,连续给药15天,并在停药后第0、1、2、3、4和5天分别采取颈静脉放血处死5只鸡,分别采集肌肉、肝脏、“皮肤+脂肪”组织,采用建立的HPLC-FLD方法进行药物浓度的测定,采用统计矩理论处理鸡组织中的药物浓度-时间数据,计算出马杜霉素在鸡组织中的残留消除参数。
测定停药后第0天在肌肉、肝脏、“皮肤+脂肪”组织中的平均药物浓度分别为0.080mg/kg、0.555mg/kg、0.194mg/kg。马杜霉素在第3天采集的肌肉和“皮肤+脂肪”组织中已不可测得,在第4天采集的肝脏组织也已不可测得。
马杜霉素在鸡组织中的残留消除参数:肌肉的T1/2β为1.438d,AUC为0.173μg·g-1·d,MRT为0.939d;肝脏的T1/2β为0.837d,AUC为0.857μg·g-1·d,MRT为0.846d:“皮肤+脂肪”的T1/2β为0.811d,AUC为0.230μg·g-1·d,MRT为0.762d。结果表明:(1)马杜霉素在鸡组织中的消除速度快;(2)马杜霉素在鸡组织中的残留分布不均,在肝脏中含量最高,其次是“皮肤+脂肪”,在肌肉中含量最少。试验采用WT1.4软件制定的统计方法来处理鸡组织中药物浓度-时间数据,计算各组织的休药期。肌肉的休药期为0天,肝脏的休药期为1.75天,“皮肤+脂肪”的休药期为0.98天。按本试验测得的组织药物浓度结果和农业部规定的最高残留限量标准,可知鸡拌料给药(马杜霉素5mg/kg)的休药期为2天,我国规定马杜霉素的休药期为5天,完全可以达到食品安全标准。