长非编码RNA基因Z38对人乳腺癌细胞BT549生物学特性的影响

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长链非编码RNA (long noncoding RNA, 1ncRNA)可以通过多种机理在DNA的结构、转录以及蛋白质的表达、构象和功能上起到极为重要的调控作用, 进而在细胞、组织和个体水平上产生重要影响。实验室前期的研究发现了一个重要的1ncRNA基因:Z38。研究表明,Z38在乳腺癌组织中高表达,而癌旁乳腺组织表达低。本文以Z38基因为对象,探究干扰Z38基因对人乳腺癌细胞BT549生物学特性的影响。主要在细胞水平和动物水平上进行研究,具体展开了以下工作:(1)向BT549细胞转染干扰Z38表达的慢病毒,经嘌呤霉素筛选,获得了稳定干扰的细胞,并采用RT-PCR技术检测Z38的表达水平,结果表明慢病毒感染效率接近100%。(2)通过MTT法检测Z38基因对BT549细胞增殖活力及化疗药物敏感性的影响,并通过单克隆法检测z38基因对细胞集落形成能力的影响。结果显示干扰Z38基因表达后,MTT检测BT549细胞的的OD (optical density)值有明显下降,即细胞活力降低,经化疗药物阿霉素处理细胞,其存活率也大大降低。(3)对Z38基因表达干扰前后的BT549细胞进行细胞周期的分析,发现Z38基因的沉默能够显著地阻碍肿瘤细胞的周期分裂行为,阻滞行为主要发生在细胞分裂间期中S期向G2期的转变中。(4)对Z38表达沉默的BT549细胞进行流式检测,比较干扰前后肿瘤细胞中CD44+/CD24-细胞群的数量差异,结果显示,干扰Z38基因的表达后,细胞中具有干细胞特性的CD44+/CD24-细胞群数量占总细胞的比例明显的减少了,推测其细胞的干性也将随之大大降低。(5)裸鼠成瘤实验用来检测Z38基因在体内表达差异对肿瘤的影响。通过对裸鼠成瘤体积与重量的测量,评估Z38基因对BT549细胞成瘤能力的影响。结果显示干扰Z38表达较大幅度的降低了BT549细胞的肿瘤增殖能力及成瘤能力。本次实验所获得的结果皆与我们的假设一致,而且与前期的研究结果支持着同样一个结论:Z38基因是一个与癌症相关的基因。
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