【摘 要】
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目的:研究健脾消癌方对人结肠癌细胞miRNA-10b/HOXD10/RhoC信号通路的调控,探讨健脾消癌方抑制CRC迁移的作用机制。方法:先用实时荧光定量PCR检测miR-10b和HOXD10 mRNA在NCM460、SW480、SW620、HCT116四种不同结肠癌细胞系中的表达情况。从以上四种细胞中选出miRNA-10b表达量最高的细胞。然后分别用10%、15%、20%健脾消癌方含药血清和1
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目的:研究健脾消癌方对人结肠癌细胞miRNA-10b/HOXD10/RhoC信号通路的调控,探讨健脾消癌方抑制CRC迁移的作用机制。方法:先用实时荧光定量PCR检测miR-10b和HOXD10 mRNA在NCM460、SW480、SW620、HCT116四种不同结肠癌细胞系中的表达情况。从以上四种细胞中选出miRNA-10b表达量最高的细胞。然后分别用10%、15%、20%健脾消癌方含药血清和1 5%的空白血清培养筛选出的细胞,培养24小时后实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-10b及HOXD10 mRNA的表达情况,免疫印迹检测法检测各组细胞HOXD10、RhoC蛋白表达情况。结果:根据实时荧光定量PCR检测miR-10b和HOXD10 mRNA在NCM460、SW480、SW620、HCT116四种不同结肠癌细胞系中的表达结果知,与NCM460细胞株相比,细胞株SW480、SW620、HCT116的HOXD10 mRNA的相对表达水平降低（P＜0.01）,miR-10b的相对表达水平有所升高（SW480P＜0.05,SW620、HCT116 P＜0.01）,与细胞株SW480、SW620相比,HCT116细胞株HOXD10 mRNA的相对表达水平有所下降（SW480P＜0.01,SW620 P＜0.05）,miR-10b相对表达水平升高（SW480 P＜0.01,SW620 P＜0.05）。HCT116细胞miR-10b表达水平在四种细胞中最高,所以选择HCT116细胞作为本次实验的研究对象来进行下一步的研究。分别用1 0%、15%、20%健脾消癌方含药血清和1 5%的空白血清培养HCT116细胞,培养24小时后实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-10b及HOXD10 mRNA的表达情况,结果提示与空白组比较,健脾消癌方1 0%浓度组miR-10b的相对表达量降低,HOXD10 mRNA的相对表达量有所升高,但差异都没有统计学意义。健脾消癌方1 5%、20%浓度组miR-10b的相对表达降低（P＜0.01）;HOXD10 mRNA相对表达升高（15%浓度组P＜0.05,20%浓度组P＜0.01）。和空白组相比,健脾消癌方10%、15%浓度组HOXD10蛋白相对表达量有所升高,RhoC蛋白相对表达量也有降低,但差异并没有统计学意义,健脾消癌方20%浓度组HOXD10蛋白相对表达量升高（P＜0.05）,RhoC蛋白相对表达量明显降低（P＜0.01）。结论:1.四种结肠癌细胞miR-10b、HOXD10 mRNA表达量不同,且两者呈负相关。2.健脾消癌方抑制结肠癌的迁移作用可能是通过下调miR-10b、RhoC,上调HOXD10实现的。
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