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目的：
本文旨在探讨新型免疫抑制剂FTY720诱导多发性骨髓瘤细胞株U266自噬及凋亡作用以及对多药耐药基因MDR1表达的影响，为临床多发性骨髓瘤的治疗提供实验依据。
方法：
一、细胞培养
将U266细胞复苏后重悬于含15％胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素的RPMI1640培养液中，置于37℃、5％CO2的饱和湿度培养箱中培养。每隔2～3天换液一次，取对数生长期细胞用于实验。
二、CCK-8法检测FTY720对U266细胞的增殖抑制率
实验分为八个组，不加药对照组、5.0、10.0、20.0umol/LFTY720组、10.0nmol/LBafilomycinA1组、10.0nmol/LBafilomycinA1+5.0umol/LFTY720组、10.0nmol/LBafilomycinA1+10.0μmol/LFTY720组及10.0nmol/LBafilomycinA1+20.0μmol/LFTY720组，作用时间24小时。应用CCK-8法检测不同浓度作用后细胞的存活率，并计算相应细胞增殖率。实验设置三个时间点，20.0μmol/LFTY720及10.0nmol/LBafilomycinA1+20.0μmol/LFTY720分别作用细胞2、6及24小时。应用CCK-8法检测不同时间作用后细胞的存活率，并计算相应细胞增殖率。
三、AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率
分别收集不加药对照组、5.0、10.0、20.0μmol/LFTY720组、10.0nmol/LBafilomycinA1组、10.0nmol/LBafilomycinA1+5.0μmol/LFTY720组、10.0nmol/LBafilomycinA1+10.0μmol/LFTY720组及10.0nmol/LBafilomycinA1+20.0μmol/LFTY720组处理24小时的细胞，应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。
四、DAPI染色荧光显微镜观察细胞核形态
分别收集不加药对照组、5.0、10.0、20.0μmol/LFTY720组处理24小时的细胞，经DAPI染色后荧光显微镜下观察细胞核形态学改变，进行图像采集。
五、实时荧光定量PCR检测多药耐药基因MDR1mRNA表达
分别收集不加药对照组、5.0、10.0、20.0μmol/LFTY720组、10.0nmol/LBafilomycinA1组、10.0nmol/LBafilomycinA1+5.0μmol/LFTY720组、10.0nmol/LBafilomycinA1+10.0μmol/LFTY720组及10.0nmol/LBafilomycinA1+20.0μmol/LFTY720组处理24小时的细胞，提取细胞总RNA，反转录得到对应的cDNA，应用Real-TimePCR扩增仪进行扩增反应，记录循环阈值(Ct值)，计算多药耐药基因MDR1基因的相对表达量。
结果：
1、5.0、10.0、20.0μmol/LFTY720均能抑U266细胞增殖，其作用呈浓度及时间依赖性。应用自噬抑制剂BafilomycinA1可解救FTY720引起的细胞生存抑制，与相同浓度及相同时间单用FTY720实验组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。
2、FTY720可诱导细胞凋亡，其作用呈浓度依赖性。应用自噬抑制剂BafilomycinA1后可解救FTY720引起的细胞凋亡，与相同浓度单用FTY720实验组间比较差异有统计学差异(P＜0.05)。
3、荧光显微镜观察不同浓度FTY720作用U266细胞24小时后各组出现细胞核染色质逐渐浓缩、高度凝集及边缘化，可见核碎片，细胞呈凋亡征象。
4、FTY720可引起多药耐药基因MDR1mRNA表达下降，其作用呈浓度依赖性。应用自噬抑制剂BafilomycinA1可解救FTY720引起的MDR1mRNA表达下降，与相同浓度单用FTY720实验组间比较差异有统计学差异(P＜0.05)。
结论：
FTY720可诱导U266细胞发生自噬及凋亡，具有剂量及时间依赖关系。FTY720可能通过自噬作用下调U266细胞多药耐药基因MDR1表达从而逆转细胞耐药。