【摘 要】
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本课题利用的重组蛋白GTH是一种新型,方便,稳定,安全性高,具有靶向性的基因转运载体。它由三部分基因融合表达而成:超嗜热古菌组蛋白HphA具有组蛋白生物学功能,能够与DNA稳定
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本课题利用的重组蛋白GTH是一种新型,方便,稳定,安全性高,具有靶向性的基因转运载体。它由三部分基因融合表达而成:超嗜热古菌组蛋白HphA具有组蛋白生物学功能,能够与DNA稳定结合,降低限制性内切酶对DNA的降解作用;PEAⅡ为绿脓杆菌外毒素A的跨膜转运区,能够完成转运作用;GnRH为促性腺激素释放激素,起到导向作用。即蛋白GTH同时具有DNA结合,跨膜转运,结合受体功能,本实验通过一系列实验证明其活性。EMSA凝胶电泳迁移实验表明,融合蛋白GTH减慢DNA在琼脂糖凝胶中的迁移速率,即融合蛋白GTH可以与绿色荧光质粒PEGFP-C1结合;细胞转染实验证明融合蛋白GTH可以运载绿色荧光蛋白质粒进入Hela细胞,并在细胞中出现荧光表达:提取被转染细胞的总DNA,PCR检测证明质粒PEGFP-C1被携带进入细胞;利用抗HphA单克隆抗体进行细胞免疫组化实验,在被转染细胞内检测到蛋白GTH的HphA组分;如上诸多实验表明融合蛋白GTH具备结合DNA及转运的能力,适用于细胞DNA转运,有望成为临床用基因转运载体,对今后基因治疗有着不可替代的作用。
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