茶树花青素积累叶片的转录组分析及CsMYBR1、CsMYBAPL1和CsMYBAPL2基因的功能研究

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茶树是世界上最重要的经济型作物之一。在茶树生长的过程中,新稍芽叶因环境或遗传等因素的影响,常发生红紫化现象,导致其相较普通新稍含有更多的黄烷醇和花青素类物质。花青素是一种天然水溶性色素,通常具有多种生理保健功能。在比较‘紫娟’和福鼎大白不同叶位生理指标的基础上,本研究通过转录组测序研究两品种花青素调控相关基因在转录水平的差异,并对所筛候选基因进行功能分析。以期通过本研究为解析茶树花青素生物合成的调控机制奠定重要的理论基础,对未来调控茶树中花青素的含量提供指导作用。(1)‘紫娟’不同叶位的花青素、酚氨比、EC、EGC、GCG、ECG、GC的含量均高于福鼎大白。此外,随着叶片嫩度的降低,除ECG、GC含量的变化呈逐渐降低的趋势,其他成分均呈现出先升高后下降的趋势。整体上,随着叶片嫩度的降低,花青素含量与其他品质成分的含量呈现出相似的变化趋势。(2)‘紫娟’和福鼎大白的一芽一叶经转录组测序,共得到51.78G的Clean reads。Clean reads经Trinity拼接、组装得到299,113条unigenes,其中48.63%的Unigenes至少被一个数据库(NR、NT、KEGG、Swiss Prot、PFAM、GO和KOG)注释。通过DESeq分析筛选出17,758个差异表达基因,它们主要富集在:苯丙烷生物合成、苯丙氨酸代谢、植物激素信号转导、光合作用、类黄酮生物合成等途径。最终,通过分析转录组数据,成功筛选到三个与茶树花青素生物合成调控相关的候选基因,分别命名。(3)亚细胞定位预测结果显示,CsMYBR1、CsMYBAPL1和CsMYBAPL2基因编码的蛋白均定位于细胞核。不同激素处理紫娟茶树新稍第二叶,ABA、GA3和SA在4h内下调CsMYBR1基因的表达,IAA、ETH和MEJA在2h内上调CsMYBR1基因的表达。构建CsMYBR1基因的过表达载体转化野生型拟南芥,3个T3纯合株系幼苗叶片出现不同程度红紫化现象。构建CsMYBAPL1和CsMYBAPL2基因的过表达载体转化拟南芥,分别筛选得到1个和4个T3代纯合株系。
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