【摘 要】
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目的评估CA3对非小细胞型肺癌(NSCLC)的抑制作用及肿瘤细胞YAP1和磷酸化YAP1(p-YAP1)表达水平是否与其对CA3的敏感性有关,并利用小鼠NSCLC模型探讨CA3的潜在治疗作用。方法采用LLC、H460、H292、LA795四种NSCLC细胞,利用流式细胞术Annexin-V/7AAD双染方法和CCK8法测定CA3对四种肿瘤细胞株的影响;免疫印迹(Western Blot)技术检测Y
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目的评估CA3对非小细胞型肺癌(NSCLC)的抑制作用及肿瘤细胞YAP1和磷酸化YAP1(p-YAP1)表达水平是否与其对CA3的敏感性有关,并利用小鼠NSCLC模型探讨CA3的潜在治疗作用。方法采用LLC、H460、H292、LA795四种NSCLC细胞,利用流式细胞术Annexin-V/7AAD双染方法和CCK8法测定CA3对四种肿瘤细胞株的影响;免疫印迹(Western Blot)技术检测YAP1及磷酸化YAP1相关的靶蛋白表达;体外CFSE标记的细胞增殖实验评估CA3对淋巴细胞的影响。以LLC细胞制备荷瘤小鼠模型,腹腔内CA3单独或联合JSI-124给药探索该药的体内潜在治疗作用。结果体外CA3对NSCLC和淋巴细胞呈现出时间、剂量依赖性的显著抑制作用。其中,CA3在2μM浓度时对四种NSCLC细胞均显示出明显的抑制作用(P<0.01),各细胞系对CA3的敏感程度依次为H460>LA795>H292>LLC。通过Western检测发现,加药前四种细胞的YAP1(total)、YAP1(D8H1X)及YAP1/TAZ(D2414)蛋白表达水平由高至低排序依次为H292>LLC>LA795>H460,LLC>LA795>H292>H460和LLC>LA795>H460>H292。加药后24h四种细胞的YAP1(total)蛋白表达水平降低,程度依次为H460>LA795>H292>LLC,与细胞对CA3的敏感性一致;YAP1(D8H1X)及YAP1/TAZ(D2414)蛋白水平降低程度均依次为H460>LA795>LLC>H292。48h时各蛋白表达水平的变化趋势与24h检测结果基本一致。用药24h后LLC、LA795细胞中p-YAP1(Ser109)升高,程度依次为LLC>LA795,H292及H460细胞的p-YAP1(Ser109)表达无明显改变;用药48h后四种细胞p-YAP1(Ser109)均升高,程度依次为LLC>H460>H292>LA795。用药24h后LLC、LA795、H292细胞中p-YAP1(Ser127)升高,程度依次为LLC>LA795>H292,H460细胞中未见明显变化;用药48h后LLC、LA795、H292细胞p-YAP1(Ser127)升高程度依次为LLC>H292>LA795,H460细胞p-YAP1(Ser127)蛋白表达仍无明显变化。用药24h后p-TAZ(S89)在LA795细胞中升高,但在H460细胞中降低,而在LLC及H292细胞中未见明显变化;48h时LLC、LA795细胞中p-TAZ(S89)表达升高,程度依次为LLC>LA795,但在H460细胞中进一步明显降低,而且在H292细胞中亦呈现不显著降低。CFSE标记的体外增殖实验中,CA3在2μM时显著抑制淋巴细胞的增殖,并产生明显的细胞毒性(P<0.01)。在荷瘤小鼠模型中,腹腔连续注射18天CA3,与对照组相比,未明显抑制肿瘤生长,但当联合JSI-124治疗时,肿瘤质量平均减小64.5±2.5%,呈极显著的抑制作用(P<0.01),并且单独使用JSI-124亦可显著抑制肿瘤生长。此外,体内联合用药对脾脏T、B细胞及胸腺细胞无显著影响(P>0.05)。结论CA3在体外能够通过诱导细胞凋亡对四种NSCLC细胞系发挥明显抑制作用且各细胞系对CA3的敏感性存在差异,但除加药后YAP1(total)蛋白外,YAP1及相关蛋白的用药前表达水平及用药后变化程度(%)均与细胞对CA3的敏感性无密切相关性。CA3体内联合JSI-124使用可较单独应用JSI-124更明显地抑制LLC生长,且对成年小鼠重要免疫器官及外周免疫细胞未见明显影响,提示CA3体内联合JSI-124使用可能有助于治疗非小细胞肺癌,但具体作用机制尚待进一步研究。
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