毛竹(Phyllostachys edulis)是中国种植最广,经济价值最高的竹种。毛竹叶中含有丰富的荭草苷、牡荆苷等黄酮,但是目前对于其中合成碳苷黄酮的糖基转移酶还没有具体研究。因此,本研究通过原核表达系统及真核表达系统成功获得了毛竹的糖基转移酶融合蛋白,然后通过体外酶促反应,对蛋白的功能进行了鉴定。该项研究对毛竹中黄酮-C-糖基转移酶催化黄酮碳苷的形成途径有了进一步认识,并为以后黄酮碳苷的生物合成技术提供了参考。本研究的主要结果如下:1.基于毛竹基因组数据,应用生物信息学分析方法,从毛竹中获得三条黄酮-糖基转移酶基因,分别命名为Pe CGT1,Pe CGT2和Pe CGT3。通过比对分析,其都属于糖基转移酶GT1家族。通过理化性质及其结构分析,其都为稳定的疏水蛋白且空间结构为GT-B型。通过进化树分析可知,Pe CGT1和Pe CGT2具有较高的相似性,其与二穗短柄草、节节麦的CGT具有较高同源性,而Pe CGT3则与蒲竹仔的CGT同源性最高。2.本研究共构建了5种原核表达载体,分别为p ET24a-Pe CGT1、p ET24a-Pe CGT2、p ET32a-Pe CGT1、p ET32a-Pe CGT2和p ET22b-Pe CGT3。将其分别转入BL21(DE3)和Rosetta(DE3)两种大肠杆菌感受态细胞中。p ET24a-Pe CGT1和p ET24a-Pe CGT2在两种大肠杆菌表达体系中均不表达。p ET32a-Pe CGT1、p ET32a-Pe CGT2和p ET22b-Pe CGT3在这两种原核表达体系中均成功表达。3.由于在大肠杆菌中表达的目的蛋白均无活性,因此构建了两个真核表达载体,即为p PIC9K-Pe CGT1和p PIC9K-Pe CGT2。其中,Pe CGT1成功表达,获得具有活性的目的蛋白。在BMMY培养基中,Pe CGT1通过1%的甲醇诱导48h后有目的蛋白的积累,在诱导96h后目的蛋白含量达到最高。经蛋白纯化、超滤浓缩后成功获得较纯的Pe CGT1蛋白。通过体外酶催化反应显示,Pe CGT1蛋白可催化2-羟基柚皮素生成两种新物质。糖基转移酶在植物的生长发育过程中有至关重要的作用。本研究首次对毛竹中黄酮-C-糖基转移酶基因进行研究,成功获得了一个糖基转移酶并鉴定了其活性,为以后毛竹中糖基转移酶深入研究奠定了基础。