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为探讨SP、VIP和Gas在ND发病过程中的作用机制及其对粘膜免疫的调节作用,本研究采用病理组织学、免疫组织化学和图像分析等技术观察了SPF鸡感染NDV后胃肠道和脑组织中SP、VIP、Gas三种脑肠肽和IEL、杯状细胞两种粘膜免疫相关细胞以及局部分泌型免疫球蛋白IgA的分布及动态变化。结果如下:
1.SPF鸡感染NDV后,抗原定位结果表明,感染后12h几乎所有组织器官中均可检测到病毒,其中脾脏、肝脏和腺胃中的病毒含量最多,脑组织中的病毒含量最少,在感染36h后,病毒在各组织器官中含量显著升高,与感染12h相比较差异显著(P<0.05)。
2.NDV感染后,鸡胃肠道SP和VIP表达量比对照组有明显的升高,在感染后72h两种物质在腺胃、十二指肠和空肠中表达量都达到高峰(P<0.01)。盲肠扁桃体中VIP的表达量也在感染后72h达到高峰(P<0.01),P物质则呈一直升高的的趋势。对照组和攻毒组鸡肠道中Gas表达量均很少,攻毒组鸡腺胃中Gas在感染后36h、72h、84h的表达量显著低于对照组(P<0.05)。
3.鸡感染NDV后腺胃、十二指肠、空肠和盲肠扁桃体中IgA的表达量分别于60h、48h、48h、72h达到高峰,均极显著的高于对照组(P<0.01);除盲肠扁桃体外,腺胃、十二指肠和空肠IgA的表达量在84h时均下降至低于对照组。攻毒组鸡腺胃中IEL数量在感染48h后一直显著高于对照组,而十二指肠、空肠及盲肠扁桃体中IEL数量在感染后均呈增多趋势,在36h~60h均显著高于对照组(P<0.05),之后呈下降趋势,至84h时均极显著低于对照组(P<0.01)。攻毒组鸡肠道中杯状细胞数量在感染后各时间段均极显著低于对照组(P<0.01)。相关性分析表明,SP和VIP与IEL、IgA含量变化有一定相关性。
4.脑组织中SP和VIP的表达量明显高于Gas的表达量,攻毒组SP在大脑中的表达量在感染60h~84h极显著高于对照组(P<0.01),在小脑中表达量在感染后48h~84h极显著的高于对照组(P<0.01)。攻毒组VIP在大脑中含量在感染后24h即表现为极显著的升高趋势(P<0.01),其在小脑中含量在感染后48h~84h极显著的高于对照组(P<0.01)。相关性分析表明二者之间表现为显著的正相关关系。
本研究结果表明,SP、VIP和Gas三种脑肠肽物质参与了鸡ND的发病过程,为丰富免疫-神经-内分泌网络学说提供了有价值的资料,同时为生产实践中进一步做好ND的防控提供了新的理论依据。