【摘 要】
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目的:构建携带mTERT启动子和m4-1BBL基因的重组腺病毒,为探讨治疗肝细胞肝癌的方法提供实验基础。观察mTERT启动子驱动的m4-1BBL基因对小鼠体内肿瘤的生长的抑制作用,探讨其
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目的:构建携带mTERT启动子和m4-1BBL基因的重组腺病毒,为探讨治疗肝细胞肝癌的方法提供实验基础。观察mTERT启动子驱动的m4-1BBL基因对小鼠体内肿瘤的生长的抑制作用,探讨其治疗潜力。方法:应用细菌内同源重组法构建重组腺病毒载体质粒pAd-mTERT -promoter-m4-1BBL,我们将得到的重组腺病毒载体质粒pAd-mTERT promoter- m4-1BBL经脂质体转染293A细胞,获得重组腺病毒。同样方法得到空载体rAd病毒。我们用rAd-mTERT promoter-m4-1BBL、rAd感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6;用RT-PCR检测转染重组腺病毒后肿瘤细胞中m4-1BBL和mTERT promoter基因的表达情况。建立C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型。我们观察8周,测定肿瘤的体积、重量、抑瘤效果。免疫组化检测目的基因的表达情况。结果:成功构建mTERT启动子和m4-1BBL基因的重组腺病毒rAd- mTERT- promoter-m4-1BBL,病毒滴度1×1010pfu/ml。满足体内外实验的需要。构建的重组腺病毒rAd-mTERT promoter-m4-1BBL能够高效感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,感染后能使小鼠的肿瘤生长减慢,CD8+细胞表达增强,荷瘤小鼠生存期延长。结论:mTERT启动子驱动的m4-1BBL基因可明显抑制小鼠肝细胞肝癌的生长,促进肝癌细胞凋亡,延长荷瘤小鼠的生存期,有良好的靶向免疫治疗效果。
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