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现代药理学研究表明,野西瓜硒多糖(Se-CSPS)具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗重金属、调节免疫等功效,野西瓜硒多糖的药理活性比多糖和硒更显著,容易被机体吸收和利用,毒副作用低,尤其在抗肿瘤方面,能够直接杀伤或杀死肿瘤细胞从而抑制肿瘤细胞的增殖。近年来,国内外对野西瓜硒多糖的研究屡见报道,但对野西瓜硒多糖抗肿瘤作用机制的研究鲜有报道。因此,本论文采用体外试验,研究野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2细胞周期阻滞作用与细胞骨架调控蛋白RhoA和Cdc42的关系,为野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2周期阻滞作用提供理论依据。本实验采用MTT法检测野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用。用浓度为0.064、0.128、0.256、0.512、1.024μmol·L-1的野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2作用72h后生长抑制率分别为17.15%,33.8%,53.47%,66.92%,79.64%,随着野西瓜硒多糖给药浓度增大,生长抑制率逐渐增强,呈剂量依赖关系。经计算,野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2作用72h后的半数抑制浓度(IC50)为0.249μmol·L-1。结果表明野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2有增殖抑制作用。采用流式细胞术、碘化丙锭染液单染法,分析空白对照组、阳性药羟基喜树碱组2.65μmol·L-1和三种不同剂量(0.125、0.25、0.5μmol·L-1)野西瓜硒多糖作用于人肝癌细胞HepG2 48h后对G2/M期的抑制率分别是13.536%,65.533%,17.783%,22.036%,39.236%,随着野西瓜硒多糖给药浓度增大,抑制率逐渐增强,呈剂量依赖关系。结果表明不同剂量(0.125、0.25、0.5μmol·L-1)野西瓜硒多糖作用于人肝癌细胞HepG2 48h后,可将人肝癌细胞HepG2有效地阻滞在G2/M期。采用Western Blot法检测,分析空白对照组、羟基喜树碱组2.65μmol·L-1和不同剂量(0.125、0.25、0.5μmol.L-1)的野西瓜硒多糖作用于人肝癌细胞HepG2 48h后细胞周期相关蛋白CDK1、CyclinB1、P21和细胞骨架调控蛋白RhoA、Cdc42的表达情况。结果显示:CDK1/β-actin 分别为:0.91,0.29,0.78,0.49,0.32。CyclinB1/β-actin 分别为:0.92,0.34,0.76,0.48,0.31。P21/β-actin 分别为:0.40,0.73,0.47,0.62,0.78。RhoA/β-actin 分别为:0.92,0.31,0.78,0.50,0.32。Cdc42/β-actin 分别为:0.90,0.36,0.76,0.54,0.32。随着野西瓜硒多糖给药浓度的增大,CDK1、CyclinB1、Rho A、Cdc42的蛋白表达与空白对照组相比显著降低,P21的蛋白表达与空白对照组相比显著升高,实验结果具有统计学意义。表明野西瓜硒多糖作用人肝癌细胞HepG2后,显著下调CDK1、CyclinB1、Rho A、Cdc42的蛋白表达水平,显著上调了 P21的蛋白表达水平。以上实验结果表明,野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用:野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2作用48 h后将细胞阻滞于在G2/M期;检测细胞周期相关蛋白和细胞骨架调控蛋白RhoA、Cdc42的表达水平,说明野西瓜硒多糖对人肝癌细胞HepG2的周期阻滞作用机制为:一方面下调细胞周期蛋白CDK1、CyclinB1的表达水平,上调P21表达水平,降低CDK1/CyclinB1复合物的活性;另一方面下调细胞骨架调控蛋白RhoA、Cdc42的表达水平,可能是影响细胞骨架的形态和细胞内肌动蛋白骨架的聚合状态、影响细胞的迁移、细胞周期的运行,使人肝癌细胞HepG2阻滞在G2/M 期。