【摘 要】
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目的:本研究采用1H NMR代谢组学技术,通过对消化性溃疡模型小鼠的胃黏膜、十二指肠组织样本代谢物的分析,结合组织病理学观察和药物成分分析,探讨加味黄连汤对消化性溃疡小鼠黏膜损伤修复作用和有效药理成分,以及其对胃黏膜、十二指肠组织的代谢响应机制。方法:40只SPF级KM小鼠按随机数字表法分成空白组、模型组、西药组和中药组。除空白组外,其余三组均通过束缚-冷应激法诱导消化性溃疡模型。造模成功后,中药
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目的:本研究采用1H NMR代谢组学技术,通过对消化性溃疡模型小鼠的胃黏膜、十二指肠组织样本代谢物的分析,结合组织病理学观察和药物成分分析,探讨加味黄连汤对消化性溃疡小鼠黏膜损伤修复作用和有效药理成分,以及其对胃黏膜、十二指肠组织的代谢响应机制。方法:40只SPF级KM小鼠按随机数字表法分成空白组、模型组、西药组和中药组。除空白组外,其余三组均通过束缚-冷应激法诱导消化性溃疡模型。造模成功后,中药组小鼠用加味黄连汤中药水煎液灌胃干预,西药组小鼠予艾司奥美拉唑镁肠溶片水溶液灌胃干预。通过H＆E染色法观察小鼠胃黏膜和十二指肠组织的病理形态变化;采用超高效液质谱联用法检测加味黄连汤水煎液中的有效成分;运用1H NMR技术进行核磁共振代谢组学检测,通过模式识别方法分析各组间代谢物质的代谢轮廓差异,并筛选出差异性代谢物,通过在线分析网站（https://www.metaboanalyst.ca/）寻找相关代谢通路。结果:胃黏膜组织病理学可见,空白组小鼠胃黏膜上皮结构完整无缺损,固有层中腺体整齐致密,细胞清晰,排列整齐;模型组小鼠的胃黏膜上皮层和固有层受到破坏,有大块的缺损,腺体中可见毛细血管出血和炎性细胞浸润;中药组和西药组小鼠的胃黏膜结构较为完整,腺体和细胞结构清晰,排列整齐,细胞间未见到炎性细胞浸润,没有明显充血及水肿。十二指肠组织病理学结果显示,空白组和中药组小鼠肠黏膜的上皮层中,肠绒毛排列整齐,突入肠腔;固有层中腺体致密,细胞排列紧密,可见十二指肠组织结构完整,腺体紧密清晰,细胞排列整齐,未见明显炎性细胞。模型组小鼠的十二指肠组织病理形态与空白组和中药组无太大区别。西药组小鼠十二指肠黏膜的肠绒毛稀疏,排列紊乱且有脱落,上皮层与固有层分离,但腺体排列尚紧密。UHPLC-MS分析结果显示,在加味黄连汤水煎液中共找到56种成分,其中黄连中有8种,半夏中有7种,桂枝中有5种,党参中有7种,大枣中有4种,干姜中有7种,甘草中有6种,仙鹤草中有6种,白芍中有6种。1H NMR结果显示,在胃黏膜中发现有关代谢标志物18种,与15条代谢通路有关,分别是:D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢;丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢;谷胱甘肽代谢;甘油脂代谢;甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢;氨酰基-tRNA生物合成;磷酸肌醇代谢;半胱氨酸和蛋氨酸代谢;精氨酸生物合成;甘油磷脂代谢;精氨酸和脯氨酸代谢;丙酮酸代谢;乙醛酸和二羧酸代谢;磷脂酰肌醇信号通路;半乳糖代谢。在十二指肠组织中共发现19种代谢物,与12条代谢通路相关,分别为:酮体的合成与降解;苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成;苯丙氨酸代谢;甘油酯代谢;烟酸和烟酰胺代谢;丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸代谢;丁酸盐代谢;甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸代谢;丙酮酸代谢;甘油磷酸脂代谢;缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的降解;鞘脂类代谢。结论:加味黄连汤能够促进消化性溃疡小鼠的胃黏膜修复;通过超高效液质谱联用法检测发现,加味黄连汤水煎液的有效成分具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用;通过代谢物表达发现,加味黄连汤可通过神经递质代谢、氨基酸代谢、氧化还原反应、糖代谢等代谢路径影响代谢物的表达,这是加味黄连汤促进溃疡愈合的可能机制,其它相关的分子响应机制仍需进一步研究。
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