【摘 要】
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目的 自制含全氟丙烷（C3F8）气体的脂质体纳米泡并测定其物理特征,观察其在体内外超声增强显影的效果,探究超声辐照微泡破裂法介导的基因转染效率。进一步试制液-气相变全氟戊烷（PFP）纳米乳剂,探索PFP纳米乳剂液-气相变的条件,为后续制备靶向性可相变的纳米乳剂提供参考和依据。方法 通过薄膜水化法制备含C3F8脂质体纳米泡,利用纳米粒度仪检测其形态、分布、平均直径、平均表面电位等物理特征,超声辐照纳
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目的 自制含全氟丙烷（C3F8）气体的脂质体纳米泡并测定其物理特征,观察其在体内外超声增强显影的效果,探究超声辐照微泡破裂法介导的基因转染效率。进一步试制液-气相变全氟戊烷（PFP）纳米乳剂,探索PFP纳米乳剂液-气相变的条件,为后续制备靶向性可相变的纳米乳剂提供参考和依据。方法 通过薄膜水化法制备含C3F8脂质体纳米泡,利用纳米粒度仪检测其形态、分布、平均直径、平均表面电位等物理特征,超声辐照纳米泡破裂法介导EGFP荧光蛋白基因在人肝癌细胞HepG2转染,利用倒置荧光显微镜观察HepG2细胞绿色荧光蛋白的表达情况,流式细胞仪定量评价转染效率,转染后用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,用FITC-PI试剂盒检测细胞凋亡情况,并将自制纳米泡与商用造影剂声诺维（SonoVue）稀释成相同的脂质质量浓度,分别在体外水囊中和兔肝脏进行造影观察,时间-强度（TIC）曲线分析造影增强情况。通过超声乳化法制备含PFP脂质体纳米乳剂,对其形态、分布、平均直径、表面电位等进行检测,观察评估其稳定性,水浴加热探索体外液-气相变的条件。结果（1）成功制得含C3F8脂质体纳米泡,光镜、透射电镜下观察呈大小、分布基本均匀的球状颗粒,无明显聚集。（2）含C3F8脂质体纳米泡浓度约为1.5-3.2×108个/ml,平均直径约为（291.3±5.3 nm）,平均表面电位为（-1.42-3.05 mv）。（3）超声造影增强TIC曲线分析,自制纳米泡开始显影时间和达峰时间与SonoVue相比无明显统计学差异（P＞0.05）,峰值强度低于SonoVue,消退时间早于SonoVue,差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）含C3F8脂质体纳米泡EGFP基因转染的研究提示相较于其他对照组和单纯超声辐照组,纳米泡+超声辐照组基因转染效率明显提高,具有统计学意义（P＜0.05）,超声处理后细胞存活率为80%;凋亡细胞数增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。（5）成功制得含液态PFP脂质体纳米乳剂,光镜下观察呈分布均匀的球状颗粒。（6）含PFP脂质体纳米乳剂加热前平均直径约为（168.0±20.0nm）,平均表面电位约（-4.82-4.19 mv）,50℃加热后平均直径约（303.1±10.3 nm）,平均表面电位约（-5.9-4.98 mv）,80℃加热后平均直径约（592.6±31.2nm）,平均表面电位约（-3.73-5.20 mv）,利用超高灵敏度流式检测仪检测加热前浓度约2.1×1011个/ml,50℃加热后浓度约1.7×1011个/ml,80℃加热后浓度约1.5×1011个/ml,侧向散射强度分别为1614.13、3235.94、6456.54,直径随着温度的升高逐渐增大,与纳米粒度仪检测结果一致,加热后纳米粒的损失量不大。（7）分别在50℃、80℃水浴加热后行体外显影,80℃加热后体外显影效果明显增强。结论 制得的C3F8脂质体纳米泡可以促进超声介导的基因转染,且具备与商用造影剂SonoVue类似的造影增强作用。制得的PFP脂质体纳米乳剂稳定性更好,80℃加热后体外显影效果明显增强。
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