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维生素D是人体不可缺少的营养元素之一,是生长发育和维持生命活动所必须的物质,通过维生素D受体发挥主要作用。越来越多证据表明,维生素D缺乏与女性生殖障碍有直接或间接的关系,如多囊卵巢综合症。结合卵巢颗粒细胞合成雌激素的途径,我们初步研究了维生素D对卵巢颗粒细胞合成和分泌雌激素的影响。以期为临床治疗女性不孕不育症提供参考和实验基础。首先,我们以人类正常女性和患PCOS女性的卵巢颗粒细胞为实验材料,利用ASB600抗体芯片技术进行颗粒细胞中差异表达蛋白的筛选。结果发现,与正常颗粒细胞相比,患PCOS女性的颗粒细胞中有8种蛋白有显著的变化,为以后进一步研究这些蛋白的变化与PCOS的关系打下了基础。而VDR在PCOS卵巢颗粒细胞有中等幅度的调升,可能是PCOS患者体内可能长期缺乏VD所致。其次,从优化大鼠卵巢颗粒细胞的体外培养体系入手,通过PMSG预处理、比较幼鼠与成鼠培养细胞的生长状态、调整血清浓度等措施,可以得到状态良好、生长旺盛、体外培养时间超过120h的细胞,Western和免疫荧光检测显示,培养的细胞能表达卵巢颗粒细胞的标志性蛋白FSHR,且FSHR的阳性率能达到90%以上。同时,检测出培养的颗粒细胞中均可表达VDR,说明卵巢颗粒细胞是VD的靶细胞。第三,我们对1,25-(OH)2-VD3与FSH对颗粒细胞合成和分泌雌激素的影响及其相互协同作用进行了进一步研究。结果提示,1,25-(OH)2-VD3单独使用时,对颗粒细胞合成和分泌雌激素没有显著的促进作用;在有合适浓度的FSH和雄烯二酮存在的情况下,有发挥促进作用潜力;在高雄激素存在的情况下,1,25-(OH)2-VD3的作用被削弱。另外,1,25-(OH)2-VD3对大鼠在体卵巢颗粒细胞中雌激素合成的关键酶--细胞色素P450芳香化酶的表达也影响不大。最后,初步研究了 1,25-(OH)2-VD3对卵巢颗粒细胞内游离钙浓度的影响,结果显示:1,25-(OH)2-VD3对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞内[Ca2+]i水平有增强作用,在120min内呈现时-效关系,荧光检测显示,1,25-(OH)2-VD3可增加荷钙颗粒细胞的数量。由于细胞内[Ca2+]i具有第二信使的功能,所以体内维持一定量VD的水平,以保障颗粒细胞内[Ca2+]i,并通过[Ca2+]i第二信使功能的发挥,维持颗粒细胞的正常代谢和正常功能。综上所述,在实验条件下,VD短期内对大鼠卵巢颗粒细胞合成和分泌雌激素以及CYP450表达量的影响有限,所以不适合作为临床治疗PCOS的手段;但由于VD对提高大鼠卵巢颗粒细胞中[Ca2+]i的水平有一定程度的作用,所以维持机体内一定浓度的VD无疑对预防PCOS的发生和延缓其进展是有益的。