目的:建立三色法流式细胞术检测T淋巴细胞内细胞因子的方法;探讨核因子κB在支气管哮喘患者T淋巴细胞表达Th1/Th2类细胞因子γ—干扰素(γ—IFN)/白细胞介素4(IL-4)的调控信号传导中的作用。 方法:1.正常人外周血在12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)、Ionomycin和monensin存在的条件下在体外短期培养,进行细胞膜表面抗原和细胞内细胞因子染色,用流式细胞仪对淋巴细胞内细胞因子进行测定,并对分析方法中细胞膜表面抗体的选择和不同刺激时间对测定结果的影响等进行了探讨。2.选取轻-中度急性发作期哮喘患者20例,正常对照20例。正常对照组取外周血加入PMA培养。哮喘患者取外周血并分成2组培养。第一组加入PMA,第二组同时加入PMA和核因子κB抑制剂二硫代氨基甲醇吡咯烷(PDTC)。将培养的外周血用三色法流式细胞术检测T淋巴细胞亚群。 结果:1.选用不同的单抗和刺激剂的刺激时间不同,对实验结果有较大影响。2.加入PMA培养的哮喘患者T淋巴细胞Th1,Th2,Th1/Th2与正常对照组比较差异有显著性,且与同时加入PMA和PDTC培养的哮喘患者外周血T淋巴细胞组比较也有显著性。哮喘患者Th1细胞、Th1/Th2较正常人明显降低,而哮喘患者的Th2细胞较正常人明显升高。同时加入PMA和PDTC培养的哮喘患者外周血T淋巴细胞组Th1细胞、Th1/Th2较哮喘患者明显升高,Th2细胞明显降低。 结论:1.流式细胞术是单细胞水平检测细胞内细胞因子的较为理想的方法;2.细胞内细胞因子检测的影响因素较多,分析时需选择适当的测定条件;3.T淋巴细胞活化后使淋巴细胞亚群改变可能是通过核因子κB来传导的。T淋巴细胞核因子κB信号传导途径的激活可能是哮喘的发病机制之一。