林蛙主要生活于我国的东北部,具有极高的经济与药用价值。黑龙江省林区资源丰富,具有发展林蛙养殖业的天然优势,是林蛙资源的主产地之一。寄生虫的感染会对林蛙养殖业造成严重威胁,其中线虫感染所造成的危害尤为严重,然而目前关于黑龙江省林蛙感染线虫情况还未见报道。因此,本试验对黑龙江省东北林蛙和黑龙江林蛙寄生线虫感染情况进行调查,明确黑龙江省两种林蛙线虫感染情况,为林蛙寄生线虫病防控提供技术支撑。于2019年9月到2021年12月间,在黑龙江省13个地市的39个试验点采集林蛙2318只,包括东北林蛙560只和黑龙江林蛙1758只。将所采林蛙剖检后,对肺脏、胃、肠道、膀胱和输卵管等脏器进行检查,收集线虫,通过形态学及分子生物学鉴定线虫种类,记录每只林蛙的采集地点、性别、体重及线虫感染种类和数量;分析林蛙线虫的感染率、感染强度及优势虫种等情况;利用聚合酶链式反应技术（PCR）分别扩增优势虫种的核糖体ITS序列和线粒体cox1、nad1基因,进行遗传多态性和系统发育进化树分析。本研究共鉴定出线虫5种,分别为棒线科（Rhabdiasidae）棒线属（Rhabdias）的蟾蜍棒线虫（Rhabdias bufonis）、毛圆科（Trichostrongylidae）奥库属（Oswaldocruzia）线虫未定种（Oswaldocruzia sp.）、丽尾科（Cosmocercidae）丽尾属（Cosmocerca）的Cosmocerca simile（现无中文名）、旋尾科（Spiruridae）尖旋属（Spiroxys）日本尖旋线虫（Spiroxys japonica）和丽尾科（Cosmocercidae）似丽尾属（Cosmocercoides）线虫未定种（Cosmocercoides sp.）。黑龙江省林蛙线虫的总感染率为90.08%（2088/2318）,东北林蛙和黑龙江林蛙的感染率为94.82%（531/560）和88.57%（1557/1758）。蟾蜍棒线虫、奥库属线虫、C.simile、日本尖旋线虫和似丽尾属线虫的感染率分别为89.07%、21.01%、17.43%、0.22%和0.17%。蟾蜍棒线虫不仅感染率高、感染强度大且分布广,为黑龙江省林蛙感染线虫的优势虫种。风险因素分析表明林蛙线虫感染与性别和体重无关,与栖息地点和宿主种类有显著相关性。扩增的蟾蜍棒线虫核糖体ITS序列和线粒体部分cox1、nad1基因大小分别为685bp和420 bp、512 bp,其中蟾蜍棒线虫线粒体nad1基因为首次获得。蟾蜍棒线虫的核糖体ITS和线粒体cox1、nad1基因的A+T含量分别为56.79%-57.08%、69.76%-70.95%和70.90%-72.66%,均高于G+C含量;不同地点的蟾蜍棒线虫核糖体ITS和线粒体cox1、nad1基因的种内差异分别为0-0.6%、0-7.4%和0-6.8%,cox1基因的变异高于nad1和ITS基因的变异,nad1基因的变异高于ITS基因的变异,即种内差异变异为cox1＞nad1＞ITS。本研究首次对黑龙江省两种林蛙体内线虫的感染情况进行调查,共检出5种线虫,蟾蜍棒线虫为黑龙江省林蛙感染线虫的优势虫种;并对不同地区林蛙体内的蟾蜍棒线虫的亲缘关系和遗传变异情况进行了探讨,不同基因标记下的种群间分化程度不等,但与地域无相关性。本实验为林蛙线虫病的防控提供技术支持,为蛙类寄生线虫的分子分类、群体遗传学、系统发生学的进一步研究奠定了基础。