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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,也是全世界最常见的三大恶性肿瘤之一,是导致女性死亡的主要原因。目前,乳腺癌是一全身性疾病已得到共识,早期即可全身转移。尽管治疗手段的进步提高了乳腺癌的生存率,但复发和转移仍是导致乳腺癌患者死亡的重要原因。20%-30%的乳腺癌患者会发生远处转移,并且发生转移后乳腺癌患者中位生存期仅仅只有2年。三阴性乳腺癌(triple-negativebreast cancer,TNBC)即雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,HER2)均为阴性,通常有更高的组织学分级,并且伴随TP53突变,预后差。由于其受体阴性,不适于内分泌治疗及Her2靶向治疗,临床上主要采取手术联合化疗的方法,但该类乳腺癌患者生存率明显低于其他类型乳腺癌患者。因此为该类患者寻找更加有效的治疗方式尤为重要。肿瘤转移是一个复杂的动态过程,大致可概括为三个过程,即转移起始过程、转移进展过程、转移毒力(致病)过程。上皮间质转化在转移起始和进展过程均有非常重要的作用。在转移起始过程,上皮间质转化使肿瘤细胞失去上皮细胞极性,脱离原发灶,侵入间质,进入血管。在转移进展过程,上皮间质转化支持循环中的肿瘤细胞存活并溢出血管、定居在远处转移器官。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指特定的生理、病理状况下,上皮细胞向间质细胞形态转化,从而增强细胞迁移和运动能力。在机体病理状态下,尤其是肿瘤中,上皮间质转化扮演重要角色。乳腺癌细胞发生EMT后侵袭和转移能力增强。EMT过程重要的分子事件是E-cadherin表达下调,N-cadherin和Vimentin表达上调。因此可通过检测这三个分子来验证是否发生 EMT。肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin-syetem,RAS)是人体体液调节系统的重要组成部分。RAS系统包含着多种多肽、酶、及受体,调节人体血压、水和电解质平稳。越来越多的研究发现除了调节人体水和电解质平衡以及血压平稳外,RAS系统与细胞增生、凋亡、炎症、血管新生、肿瘤发生密切相关。肾素原(prorenin)、肾素(renin)及其受体肾素(原)受体((pro)reninreceptor,PRR)是RAS系统重要组成部分,有越来越多的证据表明PRR与肿瘤的发生和血管新生有着密切联系。PRR是由350个氨基酸组成的跨膜区域蛋白,由Nguyen等发现和成功克隆,其编码基因叫做ATP6ap2/PRR,位于人X染色体上(Xp11.4)。它通过与肾素和肾素原结合而发挥生理和病理作用。有文献报道PRR在乳腺癌组织及细胞中高表达,并且阻断(P)RR,乳腺癌细胞生长也受到抑制,但是具体机制不详。因此,我们设想PRR能否促进乳腺癌细胞的增殖,并通过影响EMT促进乳腺癌细胞的侵袭和转移。目的:检测PRR对乳腺癌MCF-7细胞的侵袭和转移能力的影响以及与EMT的关系。方法:1.采用免疫组化检测PRR在乳腺癌组织和癌旁组织是否有表达差异。采用免疫荧光法检测乳腺癌组织,明确PRR的定位。2.分别以 human-PRR-siRNA 和 negatlive control-siRNA 转染 MCF-7 细胞株。然后以Westem blot,PCR法检测PRR,根据PRR表达情况不同,将乳腺癌细胞株分成实验组和对照组。实验组(MCF-7-PRR-si):PRR被SiRNA沉默的乳腺癌MCF-7细胞;对照组(MCF-7-NC):未沉默PRR的乳腺癌MCF-7细胞。3.CCK-8实验检测MCF-7细胞增殖能力。4.Transwe实验检测MCF-7细胞侵袭和转移能力。5.Westem blot,PCR 法检测 EMT 标志物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)蛋白和mRNA表达情况。6.免疫组化检测β-catenin在乳腺癌组织和癌旁组织的表达。结果:1.免疫组化表明PRR在癌组织和癌旁组织均有表达。但在癌组织中的表达比癌旁组织明显增高;进一步的免疫荧光表明PRR主要表达于乳腺癌细胞而不是间质。2.CCK-8实验示相同时间和条件下,实验组(MCF-7-PRR-si)OD值要小于对照组(MCF-7-NC)OD值,提示实验组(MCF-7-PRR-si)细胞生长速度慢。3.Transwell侵袭结果示实验组(MCF-7-PRR-si)穿出小室的MCF-7细胞细胞数显著低于对照组(MCF-7-NC)(p<0.05)。transwell迁移实验示,实验组(MCF-7-PRR-si)迁移到下室的细胞数目少于对照组(MCF-7-NC)(p<0.05),提示对照组MCF-7细胞侵袭和迁移能力强。4.Western blot检测示:实验组(MCF-7-PRR-si)E-cadherin蛋白表达高于对照组(MCF-7-NC),而 N-cadherin、Vimentin 表达低于对照组(MCF-7-NC)。PCR示:实验组E-cadherin mRNA表达高于对照组(MCF-7-NC),而N-cadherin和Vimentin mRNA表达低于对照组(MCF-7-NC)。5.免疫组化显示β-catenin在癌组织表达高于癌旁组织。结论:PRR可通过调节EMT促进乳腺癌MCF-7细胞株的侵袭和转移。