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目的:肾小球肾炎(glomerular nephritis,GN)是慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)的常见病因之一,其发病机制复杂,炎症细胞与肾脏固有细胞之间的相互作用是GN发生发展的基础,细胞和体液免疫参与肾脏病理的全部过程。但目前GN的诊断、治疗以及病情评估主要依赖于肾穿刺活检术,有创的肾活检因其自身所具有的风险,导致肾脏疾病的活检率并不高,而且很难进行频繁的活组织检查以监测疾病的进展及转归状态,若能找到一种方法能判断肾活检的必要性并且能作为肾小球肾炎的辅助诊断工具则能极大程度的帮助GN的诊断及病情评估。而今有研究提示肾炎患者尿液中检出的免疫细胞可以作为了解肾小球肾炎的窗口,流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,多参数且准确性好,因此,本实验的目的是应用流式细胞术分析尿免疫细胞,评估尿流式细胞术作为无创性检查手段,在在肾脏疾病尤其肾小球肾炎的诊疗、评估等方面的价值。
方法:本研究应用流式细胞术检测尿液中的细胞表型,对患者尿液中的免疫细胞类型进行分析。选择的研究对象为2017年10月-2019年12月于大连医科大学附属第二医院医院住院并且经肾穿刺活检术明确肾脏病理类型的患者,收集患者晨起的第二次尿液100ml进行流式细胞学分析,同时记录患者的血液生化指标血肌酐(serum creatinine,Scr)、胱抑素C(Cystatin C,Cys C)、血尿酸(uric acid,UA)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血白蛋白、甘油三酯(glycerin trilaurate,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、尿蛋白(urine protein,uPRO)、镜下红细胞及相关病史及用药史,用秩和检验及Logistic回归模型等统计学方法对数据进行统一分析。
结果:1、血尿患者中,非肾小球肾炎(Non-glomerular nephritis,NGN)患者尿液中几乎不能检测到免疫细胞,而GN患者尿液中CD45+(P=0.019)、CD11b+(P<0.001)、CD14+(P<0.001)、CD3+(P=0.007<0.05)细胞较NGN患者明显更多,用Logistic回归模型做多因素分析及ROC曲线,结果显示尿免疫细胞对血尿患者中的GN具有识别能力。
2、增殖性GN患者尿液中检测到的CD45+(P=0.045)、CD11b+(P=0.038)、CD14+(P=0.010)、CD3+(P<0.001)、235a+(P=0.046)细胞水平较非增殖性GN组更多。
3、大多微小病变肾病(minimal change disease,MCD)患者尿液中不能检出明显的免疫细胞,膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者尿液中检出的免疫细胞主要为CD11b+细胞,而在IgA肾病(IgA nephropath,IgAN)、局灶性节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)患者尿液中不仅检出到一定比例的CD11b+细胞,也可检出一定比例的CD3+细胞,且IgAN患者尿液中检出的CD3+细胞数量明显高于MN、MCD患者,但在CD11b+、CD14+、siglec8+细胞的数量数量水平上,结果并未提示在IgAN、MN、及FSGS组间存在统计学差异。
4、在针对IgAN患者的研究结果则显示,牛津分型中病理为C1(细胞或纤维细胞性新月体百分比0-25%)和C2(细胞或纤维细胞新月体性百分比≥25%)的患者尿液中检出的CD3+细胞较病理为C0(无新月体形成)患者尿液中检出CD3+细胞明显增加(P=0.043、P=0.040),这提示肾脏有新月体形成的患者尿液中更易检出CD3+细胞。
结论:流式细胞术能够对尿液细胞进行有效分析,而尿液中的免疫细胞可以一定程度上反映肾脏的炎症状态,甚至对不同类型的肾脏疾病具有特异性反映,在肾脏疾病临床诊疗、病情评估、判断预后等方面可能具有重要意义,为肾小球肾炎提供了一种很有前途的无创性诊断方法。
方法:本研究应用流式细胞术检测尿液中的细胞表型,对患者尿液中的免疫细胞类型进行分析。选择的研究对象为2017年10月-2019年12月于大连医科大学附属第二医院医院住院并且经肾穿刺活检术明确肾脏病理类型的患者,收集患者晨起的第二次尿液100ml进行流式细胞学分析,同时记录患者的血液生化指标血肌酐(serum creatinine,Scr)、胱抑素C(Cystatin C,Cys C)、血尿酸(uric acid,UA)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血白蛋白、甘油三酯(glycerin trilaurate,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、尿蛋白(urine protein,uPRO)、镜下红细胞及相关病史及用药史,用秩和检验及Logistic回归模型等统计学方法对数据进行统一分析。
结果:1、血尿患者中,非肾小球肾炎(Non-glomerular nephritis,NGN)患者尿液中几乎不能检测到免疫细胞,而GN患者尿液中CD45+(P=0.019)、CD11b+(P<0.001)、CD14+(P<0.001)、CD3+(P=0.007<0.05)细胞较NGN患者明显更多,用Logistic回归模型做多因素分析及ROC曲线,结果显示尿免疫细胞对血尿患者中的GN具有识别能力。
2、增殖性GN患者尿液中检测到的CD45+(P=0.045)、CD11b+(P=0.038)、CD14+(P=0.010)、CD3+(P<0.001)、235a+(P=0.046)细胞水平较非增殖性GN组更多。
3、大多微小病变肾病(minimal change disease,MCD)患者尿液中不能检出明显的免疫细胞,膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者尿液中检出的免疫细胞主要为CD11b+细胞,而在IgA肾病(IgA nephropath,IgAN)、局灶性节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)患者尿液中不仅检出到一定比例的CD11b+细胞,也可检出一定比例的CD3+细胞,且IgAN患者尿液中检出的CD3+细胞数量明显高于MN、MCD患者,但在CD11b+、CD14+、siglec8+细胞的数量数量水平上,结果并未提示在IgAN、MN、及FSGS组间存在统计学差异。
4、在针对IgAN患者的研究结果则显示,牛津分型中病理为C1(细胞或纤维细胞性新月体百分比0-25%)和C2(细胞或纤维细胞新月体性百分比≥25%)的患者尿液中检出的CD3+细胞较病理为C0(无新月体形成)患者尿液中检出CD3+细胞明显增加(P=0.043、P=0.040),这提示肾脏有新月体形成的患者尿液中更易检出CD3+细胞。
结论:流式细胞术能够对尿液细胞进行有效分析,而尿液中的免疫细胞可以一定程度上反映肾脏的炎症状态,甚至对不同类型的肾脏疾病具有特异性反映,在肾脏疾病临床诊疗、病情评估、判断预后等方面可能具有重要意义,为肾小球肾炎提供了一种很有前途的无创性诊断方法。