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慢性疼痛的治疗一直是临床的难点,冷刺激可以缓解慢性疼痛并可避免常用镇痛药物的副作用,但过度的冷刺激却可诱发疼痛和冷觉过敏。TRPs通道是位于细胞膜上的一类重要的阳离子通道,在慢性疼痛中发挥重要作用,是近年研究的热点。TRPM8是TRPs通道家族的重要成员,主要感知冷刺激,可被包括薄荷醇、icilin等在内多种凉性化合物及低温(<28℃)激活。TRPM8的确定为研究冷刺激与疼痛的关系提供了新的途径和手段。本研究以建立关节炎大鼠模型为基础,通过薄荷醇及TRPM8反义寡核苷酸激活或者抑制TRPM8,着重探讨TRPM8在慢性炎性疼痛大鼠中的作用。期望这些研究结果能为日后相关炎性疼痛研究及治疗提供依据。第一部分：关节炎大鼠背根神经节TRPM8表达的变化目的：建立完全弗氏佐剂关节炎大鼠,观察其背根神经节TRPM8的表达变化,以探讨TRPM8在冷觉过敏形成中的意义。方法：将30只健康雄性SD大鼠,体重300±20g,随机分成5组(n=6),制成弗氏佐剂关节炎模型,分别为关节炎1天组(CFA-1组)、关节炎4天组(CFA-4组)、关节炎7天组(CFA-7组)、关节炎10天组(CFA-10组)、关节炎14天组(CFA－14组)；将30只健康雄性SD大鼠随机分成5组(n=6),制成对照模型,分别为对照1天组(NS-1组)、对照4天组(NS-4组)、对照7天组(NS-7组)、对照10天组(NS-10组)、对照14天组(NS-14组)。动态监测大鼠行为学指标,以免疫组织化学方法检测大鼠DRG的TRPM8表达。结果：模型建立后随着时间的推移,大鼠右侧L5DRG的TRPM8表达上调,CFA-7组、CFA－10组、CFA-14组三组大鼠TRPM8表达水平达到峰值。对照组DRG的TRPM8表达没有变化。结论：DRG内TRPM8可能参与冷觉过敏的形成机制。第二部分：薄荷醇和TRPM8反义寡核苷酸对慢性关节炎大鼠痛觉过敏和背根神经节TRPM8表达的影响目的：建立完全弗氏佐剂关节炎大鼠模型,观察薄荷醇、反义寡核苷酸对大鼠行为学的影响以及背根神经节TRPM8的表达变化,以探讨TRPM8在慢性炎性痛大鼠中的作用。方法：健康雄性SD大鼠,体重300±20g,行鞘内置管,随机分成8组(n=8),其中4组制成弗氏佐剂关节炎模型,鞘内分别给予薄荷醇100μg/kg(CFA-Menthol组)、生理盐水20μl(CFA-NS组)、反义寡核苷酸60μg/kg(CFA-Antisense组)、错义寡核苷酸60μg/kg(CFA-Missense组)；另外4组制成对照组(假炎症组),鞘内分别给予薄荷醇100μg/kg(NS-Menthol组)、生理盐水20μl(NS-NS)组)、反义寡核营酸60μg/kg(NS-Antisense组)、错义寡核苷酸60μg/kg(NS-Missense组)。其中,CFA-Menthol组、CFA-NS组、NS-Menthol组、NS-NS组大鼠致炎后第14天给药1次；CFA-Antisense组、CFA-Missense组、NS-Antisense组、NS-Missense组致炎后第9天给药,每天2次,连续5天。动态检测大鼠冷板指标、机械缩爪阈值及热板缩爪潜伏期。采用免疫组化、western blot检测以上各组右侧L5DRG内TRPM8的表达。结果：CFA-Menthol组大鼠鞘内给予薄荷醇后冷觉过敏增强,热痛敏和机械痛敏有所逆转；CFA-Antisense组大鼠冷觉过敏有所缓解。免疫组化及western结果显示,CFA-Menthol组、CFA-NS组以及CFA-Missense组致炎大鼠右L5DRG内TRPM8表达上调,鞘内给予反义寡核苷酸的CFA-Antisense组、NS-Antisense组大鼠右L5DRG内TRPM8表达下调。结论：鞘内给予薄荷醇激活表达上调的TRPM8使致炎大鼠冷觉过敏增强,热、机械痛敏逆转；鞘内给予反义寡核苷酸阻断TRPM8表达,使致炎大鼠冷觉过敏有所缓解,而对非致炎大鼠的行为学没有影响。慢性炎性疼痛大鼠的冷觉过敏的变化与TRPM8表达变化有关,薄荷醇的镇痛作用与TRPM8表达上调有关。第三部分：薄荷醇、TRPM8反义寡核苷酸的ED50、ED95的测定目的：建立完全弗氏佐剂关节炎大鼠模型,测量大鼠对薄荷醇、反义寡核苷酸反应的ED50、ED95,以探讨其在炎性痛大鼠中的量效关系。方法：健康雄性SD大鼠,体重300±20g,行鞘内置管,随机分为14组(n=10),制成弗氏佐剂关节炎模型,其中7组第14天鞘内分别给予生理盐水20μl、薄荷醇31.62μg/kg、39.81μg／kg、50.12μg／kg、63.10μg／kg、79.43μg／kg、100.00μg／kg；另7组致炎后第9天鞘内分别给予生理盐水20μl、反义寡核苷酸18.97gg／kg、23.89gg／kg、30.07μg／kg、37.86μg／kg、47.66μg／kg、60.00μg／kg,每天2次,连续5天；第14天冷板测量大鼠右后足抬足次数,以盐水对照组抬足次数为标准,薄荷醇组升高30%记为有效,反义寡核苷酸组降低30%记为有效。按Probit模型分别计算薄荷醇、反义寡核苷酸的ED50及ED95。结果：薄荷醇的ED50、ED95分别为：53.36μg／kg、88.31μg／kg；反义寡核苷酸的ED50、ED95分别为：29.92μg／kg、50.36μg／kg。结论：薄荷醇的ED50、ED95分别为：53.36μg／kg、88.31μg／kg；反义寡核苷酸的ED50、ED95分别为：29.92μg／kg、50.36μg／kg。