Bmal1,又称烃受体核转位蛋白ARNTL(Aryl hydrocarbon receptor nucleartranslocator-like),是哺乳动物生物钟转录和翻译反馈环中的核心成分。有研究指出Bmal1基因不仅存在于哺乳动物的生殖器官,而且参与动物的繁殖功能的调控,但该基因在牛的生殖方面鲜有报道。为了探索Bmal1基因在牦牛卵巢中表达的分布特点和规律,以及Bmal1基因对牦牛卵巢颗粒细胞激素分泌和细胞凋亡的影响。本研究从西宁市裕泰屠宰场采取健康的牦牛卵巢,应用免疫组化技术探索BMAL1蛋白在牦牛卵巢的定位以及分布特点;再通过体外培养卵巢颗粒细胞,应用qRT-PCR技术检测Bmal1基因在体外24h内不同培养时间点颗粒细胞的规律性表达。然后,应用siRNA抑制体外培养卵巢颗粒细胞中Bmal1基因的表达,利用ELISA检测细胞培养基中雌二醇(E2)和孕酮(P4)的含量,通过qRT-PCR和Western blot检测激素受体基因及合成基因的表达;最后,利用Annexin V染色法检测颗粒细胞的凋亡情况,再通过qRT-PCR和Western blot两个水平检测细胞凋亡因子Bax和Bcl-2的表达量。研究结果如下:(1)在牦牛卵巢中,BMAL1蛋白主要在生殖上皮以及不同大小的卵泡颗粒细胞层中表达。(2)经地塞米松模拟处理后,Bmal1基因在体外24h内不同培养时间点的牦牛颗粒细胞中的表达表现为节律性。(3)抑制了Bmal1基因的表达后,与对照组相比,细胞培养基中E2和P4的含量都明显降低;而经过mRNA和蛋白水平检测激素分泌有关基因的相对表达量发现:颗粒细胞中激素受体基因(Fshr和Erβ)以及激素合成基因(Cyp19a1和Star)的表达量都出现了下调。(4)抑制Bmal1基因的表达后,凋亡的颗粒细胞数量增多(P<0.01);并且促进凋亡的基因Bax表达出现上调,抑制凋亡的基因Bcl-2表达表现为下调。通过以上研究结果得出:牦牛卵巢颗粒细胞中存在Bmal1基因和时钟节律分子机制;而且干扰Bmal1基因能抑制牦牛颗粒细胞中的激素分泌以及促进颗粒细胞的凋亡。