表观遗传修饰中的组蛋白修饰包括有组蛋白甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化等。这些修饰可改变染色体的状态，影响转录因子与DNA序列的结合，对基因的表达起调控作用。研究发现甲基化的异常和多种人类疾病如肿瘤的发生相关，它的异常可特异性的激活或者抑制某些基因的转录。目前研究发现赖氨酸甲基转移酶SET9能够甲基化组蛋白和非组蛋白，其能甲基化非组蛋白底物p53的372位赖氨酸从而增加p53的稳定性，并影响p53对下游蛋白的调控。p53作为一种肿瘤抑制因子，在预防肿瘤的发生过程中起到重要的作用。在各种外界刺激下，p53蛋白能通过调控下游的靶基因来启动各种应激反应。正常p53蛋白能与DNA结合并参与DNA损伤修复、调控细胞增殖与凋亡、参与细胞分化与转录调节等。Purα是一个多功能蛋白，广泛存在于生物体内且能与特定的DNA和RNA核酸序列结合，同时还具有启动DNA复制、调控转录、参与mRNA运输与翻译、参与DNA损伤修复等功能。 本实验室的前期实验发现Purα和组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET9之间存在相互作用。由于p53是SET9甲基化底物之一，而Purα和p53都具有参与DNA损伤修复的功能，所以本课题实验主要研究Purα/SET9蛋白复合物对于p53甲基化的作用机制。本课题将实验室已有的N-TAP-Purα重组载体改造为pIRES-Flag-Purα重组载体，转染293T细胞获得稳定表达Purα的293T细胞株。加入DNA损伤试剂阿霉素来模拟在细胞DNA损伤修复条件下Purα对于p53蛋白的影响，结果表明阿霉素处理会提高p53蛋白372位甲基化，而Purα蛋白的表达也能够提高p53蛋白K372位甲基化。p53蛋白K372位甲基化与K382位、K373位乙酰化有关，实验研究结果表明Purα蛋白对p53蛋白K382位乙酰化无影响，但对K373位乙酰化有抑制作用。细胞免疫荧光共定位实验表明Purα和SET9在DNA损伤情况下有入核现象。本课题还构建了AD-SET9、AD-Purα、BD-SET9、BD-Purα四个酵母双杂交载体，用于下一步的酵母双杂交实验，研究Purα和SET9蛋白是否在体内相互作用。以上这些实验工作为进一步研究Purα的功能奠定了基础，也为其与SET9蛋白对于p53蛋白甲基化的调控机制提供了实验依据。而Purα对于SET9甲基化p53蛋白的过程具体调控机制还有待进一步研究。