【摘 要】
：
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是目前世界上用途最广、产量最大的微生物杀虫剂,在世界范围内得到广泛的应用。编码Bt杀虫蛋白的基因也作为最主要的杀虫基因转入
论文部分内容阅读
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是目前世界上用途最广、产量最大的微生物杀虫剂,在世界范围内得到广泛的应用。编码Bt杀虫蛋白的基因也作为最主要的杀虫基因转入到了多种重要的粮棉作物中,在害虫防治中起着巨大的作用,但目前害虫对Bt的抗药性已日趋严重。小菜蛾Plutella xylostella (L.)是十字花科蔬菜的主要害虫,也是至今唯一在田间发现已对Bt产生抗性种群的害虫。蛋白转导结构域(Protein transduction domain, PTD)是一类能自动穿透细胞膜,并能作为载体将其它生物大分子携带进入细胞膜内的一段富含精氨酸的多肽。本研究利用TAT(一种PTD)作为载体携带生物大分子透过细胞膜的能力,在本实验室构建的TAT-Cry1Ac融合表达蛋白的基础上,从融合杀虫蛋白对敏感、抗性小菜蛾BBMV的亲和能力;融合杀虫蛋白与敏感、抗性小菜蛾类钙粘蛋白(Cadherin-like protein, CAD)的亲和特性等方面研究PTD对微生物杀虫剂的增效和克抗机理。具体结果如下:1.表达的六种融合杀虫蛋白对小菜蛾3龄幼虫进行毒力测定,结果表明:六种杀虫蛋白浸渍叶片后对敏感和抗性小菜蛾均有杀虫活性,加TAT肽的融合蛋白比未加TAT肽的融合蛋白的杀虫活性均有一定程度的提高。如pET-21b+6His-tat-Cry1Ac(T)对美国敏感种群的LC50为1.19mg/L,而pET-21b+6His -Cry1Ac(P)对美国敏感种群的LC50为6.6mg/L,增效倍数达到5.54倍;pET-21b-tat-Cry1Ac+6His(T′)对美国抗性种群的LC50为12.94mg/L,而pET-21b-tat-Cry1Ac+6His(P′)对美国抗性种群的LC50为27.18mg/L,增效倍数为2.1倍,证明TAT肽对Bt杀虫蛋白Cry1Ac具一定的增效作用,增效作用达显著水平。2.对克隆的小菜蛾抗性品系和敏感品系的钙粘蛋白核苷酸进行分析,结果显示:钙粘蛋白核苷酸全长5314bp,编码1716个氨基酸。两者氨基酸一致性达到99.42 %,抗性品系相对于敏感品系,有10个氨基酸发生替换。3.将CAD基因克隆到转移载体pFastBacHTb,后转座到感受态细胞DH10Bac,得到重组杆粒Bacmid/CAD后,转染Tn细胞进行表达,获得重组的CAD蛋白。SDS-PAGE电泳结果表明,表达产物的分子量约为200kD,与理论值相符。Western-blot结果显示表达产物与CrylAc结合后,可以与CrylAc的多克隆抗体结合,进一步说明目的蛋白CAD得到了表达,证明CAD是CrylAc的受体。4.利用ELISA免疫检测方法间接测定了融合杀虫蛋白与小菜蛾中肠BBMV、融合杀虫蛋白与钙粘蛋白的亲和性,结果表明TAT肽可显著地增强Cry1Ac与BBMV、钙粘蛋白的结合能力,如pET-21b+6His-tat-Cry1Ac(T)与美国敏感种群BBMV的OD450值为0.207,pET-21b+6His -Cry1Ac(P)的为0.165;T与敏感种群钙粘蛋白的OD450为0.217,P与钙粘蛋白的OD450为0.1775。说明了TAT肽能够通过增加杀虫蛋白与小菜蛾中肠上皮细胞的亲和力而提高Cry1Ac的活性,达到克服小菜蛾对Cry1Ac抗性的目的。
其他文献
摘 要：随着城市建设飞速发展，在建筑业繁荣的背景下，建筑主管部门受到的投诉也多了起来，特别是住房混凝土的裂缝是最普遍的问题之一。作为一个建筑工作者，在当前施工中如何克服水泥混凝土裂缝是一件非常重要的事，本文将对水泥混凝土裂缝的成因进行分析，并提出预防措施和处理方法。 关键词：混凝土裂缝； 温度裂缝；收缩裂缝；混凝土结构；受力裂缝 一 、 混凝土裂缝的类型及成因 造成混凝土裂缝的原因是多方面的
摘 要：在教师的指导下，学生能真正参与到课堂中来，为获得知识、掌握技能、提高能力、关注社会中与化学有关的热点问题、树立辩证唯物主义世界观、树立责任感和使命感而学。 关键词：初中化学；教学初探；提高能力 新课程教学要求时短高效，但不等于不要教学质量，素质教育也不等于不要学生的认知基础。那么，怎样才能做好初中化学课堂教学高效呢？我结合多年的教学实践，在此谈一些个人的体会。 一、培养学生的化学思维
摘 要：煤矿灾害和事故，在工业生产事故中占有很大比例。因此研究如何有效地控制煤矿安全风险具有十分重要的理论和现实意义。本文综述了国内外煤矿安全评价理论与技术的研究现状，用自己的方法简单的对煤矿系统进行了安全评价。 关键词：安全评价；分析法；安全管理 1 引言 安全是人类自存在以来就面临的时至今日仍是人类迫切要求解决的课题。随着人类社会的发展，文明程度的提高，人们对安全的要求和重视程度也越来越
摘 要：近年来，我国的经济处在不断的发展之中，而伴随着经济的不断发展，我国的科学技术也在不断地进步。当前，扩谱通信技术已经成为了现代信号处理的一种主流方式，扩谱通信技术有着许多的优越性，比如说其信息隐藏能力很强，而且扩谱通信技术也十分易于组网。当前我国的电磁环境变得越来越复杂，所以为了能够使得复杂电磁环境中的通信信号得到很好地处理，就将扩谱通信抗干扰技术应用到了现代的信号处理之中。本文就扩谱通信抗
摘 要：英语是一门具有知识性、交际实践性的学科，小学英语教学不仅要从学生的眼前着眼，更要为他们的将来乃至终生着想。而兴趣有是最好的老师，英语教师在教学中注重以趣导学，以趣激学，加强师生情感交流，让学生在课堂中轻松地学英语，便能起到事半功倍的良好效果。 关键词：小学英语教学；学习兴趣；以“趣”激学 有一句话是这样说的：Having made the children interested is
（中国南方电网超高压输电公司广州局 广东省广州市510000） 摘 要：输电线路高空作业人员在登塔及转位过程中，是危险点较多的工作环节，针对现有登塔方法存在费时、费力、效率低等诸多不足状况。本项目着眼于安全性、经济性、工作高效性三方面因素，对新的登高作业方法及全身式安全带进行研究改进，提出了新的防坠方法及防坠工具，在确保安全的前提下，减少了人员上塔时间，降低了人员的劳动强度，为高空作业人员安全、
摘 要：五千年的文明史造就了今天的汉语言文学。但随着时代的发展，网络时代悄然而至，在网络中又衍生出了很多不符合汉语言语法的网络语言，为防止高中学生能够正确使用网络语言与汉语言就必须给以界定和结合，以便汉语言文学和网络语言都能够更好发展。 关键词：新时代；网络语言与汉语言文学；结合运用 汉语言文学从形成到发展的这几千年中已在人民脑中留下印记。虽然在进化发展的过程中形成自己的沉淀文化，这是近些年发
大猿叶虫Colaphellus bowringi Baly属鞘翅目Coleptera,叶甲科Chrysomelidae,无缘叶甲属Colaphellus,是我国十字花科蔬菜上的一种重要食叶害虫。本文以其为试验材料,阐述了大