目的:研究蚕沙对湿阻中焦证大鼠水通道蛋白表达的影响及作用机制,阐明蚕沙“化湿”的作用机理,扩展蚕沙作为“化湿”药的临床应用,揭示蚕沙作为药物的科学内涵,助推粪便类中药的传承与发展。方法:1.蚕沙对水通道蛋白表达的调节作用研究采用“外湿侵体+正气耗损+过食肥甘”的方法,建立“湿阻中焦”证大鼠模型,Western blot法检测肾AQP1、肺AQP1、结肠AQP3、皮肤AQP3、颌下腺AQP5蛋白的表达,q PCR法检测AQP m RNA的表达,考察蚕沙对“湿阻中焦”大鼠水通道蛋白表达的影响。2.蚕沙调节水通道蛋白表达的机理研究以Caco-2细胞为模型,应用信号通路激动剂及抑制剂,并采用RNA干扰技术,考察c AMP-PKA-CREB信号通路对水通道蛋白表达的影响,探讨c AMP-PKA-CREB信号通路在蚕沙调节水通道蛋白表达中的作用。3.蚕沙调节水通道蛋白的药效物质基础研究采用Caco-2细胞模型进行摄取实验,利用UPLC-Q-TOF-MS分析摄取前后细胞内物质的变化,应用Peak View软件分析确定细胞摄取的成分归属,阐明蚕沙调节水通道蛋白的物质基础。结果:1.Western blot法检测大鼠肾、肺、结肠、皮肤、颌下腺蛋白的表达,q PCR法检测AQP m RNA的表达。与正常组比较,“湿阻中焦”模型组大鼠肾中AQP1蛋白和m RNA表达明显升高(P<0.05),且肺AQP1、结肠AQP3、皮肤AQP3、颌下腺AQP5蛋白和m RNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组比较,蚕沙高剂量组肾AQP1蛋白和m RNA表达显著降低(P<0.05),肺AQP1、结肠AQP3、皮肤AQP3、颌下腺AQP5蛋白和m RNA表达均显著升高(P<0.05)。2.q PCR法检测信号通路激动剂、抑制剂对Caco-2细胞AQP m RNA表达的影响。结果显示,与空白对照组比较,蚕沙组AQP3 m RNA表达明显升高(P<0.05);给予AC抑制剂SQ22536、c AMP激动剂8-Br-c AMP、PKA抑制剂H-89后,与空白对照组比较,8-Br-c AMP组AQP3 m RNA的表达明显增加(P<0.05),SQ22536组、H-89组AQP3 m RNA的表达均减少(P>0.05)。与SQ22536组比,SQ22536+蚕沙组AQP3 m RNA的表达明显增加(P<0.05);与H-89组比,H-89+蚕沙组AQP3m RNA的表达明显增加(P<0.05);与8-Br-c AMP组比,8-Br-c AMP+蚕沙组AQP3m RNA的表达显著增加(P<0.05)。q PCR法检测细胞转染si RNA对AQP3 m RNA表达的影响,与空白对照组比,蚕沙组AQP3 m RNA表达显著增加(P<0.05),si RNA-CREB 100 n M组AQP3m RNA表达明显降低(P<0.05),si RNA-NC组AQP3 m RNA表达无明显差异(P>0.05)。与si RNA-CREB 50 n M组比较,si RNA-CREB 50 n M+蚕沙组AQP3m RNA的表达增加(P>0.05);与si RNA-CREB 100 n M组比,si RNA-CREB 100n M+蚕沙组AQP3 m RNA的表达增加(P>0.05)。3.通过细胞摄取实验,从细胞内共检测分析出4个化合物,包括2个生物碱类化合物荞麦碱、3-表-荞麦碱,2个黄酮类化合物紫云英苷、槲皮苷。结论:蚕沙通过调节肾、肺、结肠、皮肤及颌下腺组织中水通道蛋白的表达,发挥“化湿”作用,而对水通道蛋白的调节作用可能与其含有的荞麦碱、3-表-荞麦碱、紫云英苷及槲皮苷调节c AMP-PKA-CREB信号通路有关。