【摘 要】
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【研究背景和目的】肿瘤代谢重编程是恶性肿瘤的重要特征之一,包括糖酵解和谷氨酰胺分解增加等。近年来,脂代谢在肿瘤中的作用逐渐引起人们的关注。ATP-柠檬酸裂解酶（简称“柠檬酸裂解酶”,adenosine triphosphate citrate lyase-citrate lyase,ACLY）是脂质从头合成途径中的第一个限速酶,在结肠癌组织中ACLY的m RNA和蛋白表达水平显著升高。然而,目前关
【基金项目】
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国家自然科学基金（81372195）；
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【研究背景和目的】肿瘤代谢重编程是恶性肿瘤的重要特征之一,包括糖酵解和谷氨酰胺分解增加等。近年来,脂代谢在肿瘤中的作用逐渐引起人们的关注。ATP-柠檬酸裂解酶（简称“柠檬酸裂解酶”,adenosine triphosphate citrate lyase-citrate lyase,ACLY）是脂质从头合成途径中的第一个限速酶,在结肠癌组织中ACLY的m RNA和蛋白表达水平显著升高。然而,目前关于ACLY在结肠癌转移过程中的确切作用尚不清楚。本研究通过一系列体内外实验,探究ACLY在结肠癌转移过程中的影响和可能的分子机制。【方法】通过蛋白免疫印迹实验和实时荧光定量PCR分别检测目的基因的蛋白和m RNA表达水平;通过划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测结肠癌细胞的迁移和侵袭能力;甘油三酯和胆固醇检测反映细胞内脂质代谢情况;油红O染色直观地反映细胞内的脂滴数量;采用尾静脉注射肿瘤细胞构建结肠癌转移小鼠模型,观察体内ACLY对结肠癌转移的影响;免疫组化法检测裸鼠转移模型转移病灶和ACLY的蛋白表达水平;免疫共沉淀法检测ACLY和CTNNB1的相互作用。【结果】划痕实验和Transwell侵袭实验证实,沉默ACLY削弱结肠癌细胞的迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹实验和实时荧光定量PCR结果表明,沉默ACLY下调结肠癌细胞中上皮间质转化标志物和相关转录因子的表达;沉默ACLY后,结肠癌细胞内甘油三酯、胆固醇含量下降,脂滴数量减少;结肠癌转移小鼠模型中,沉默ACLY（KO）组的肝和肺组织中肿瘤转移灶的面积明显小于对照（Crtl）组（P＜0.001）;免疫共沉淀实验证实ACLY与CTNNB1相互结合;与对照组相比,沉默CTNNB1后,结肠癌细胞的的迁移和侵袭能力下降,过表达ACLY不能恢复。【结论】ACLY可能通过稳定CTNNB1蛋白,增强结肠癌细胞的迁移和侵袭能力。
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