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目的运用动物模型为研究对象,使用Western blot、ELISA、rt-PCR等技术,测定血管性认知功能障碍大鼠脑脊液中Srxn 1含量、大鼠脑海马组织Srxn 1的蛋白质表达水平的变化情况,探讨Sulfiredoxin-1(Srxn1)与认知功能障碍严重程度的相关性。方法1、模型制作:普通级健康雄性SD大鼠66只,周龄6w,体质量230~270g,大鼠分笼适应性喂养5d,正常光照,自由饮水和摄食,温度22℃,相对湿度50%~70%。将大鼠分为随机的五组,分别用字母A、B、C、D、E代号表示;A组为空白对照组,选有6只SD大鼠,该组大鼠不予以任何处理;B组为假手术组,选有6只SD大鼠,该组大鼠的处理方式为仅分离双侧颈总动脉;C组为常规手术组,选有18只SD大鼠,对该组老鼠运用改良2-V0法结扎双侧颈总动脉,从而建立VCI大鼠模型;D组为Srxn1-si RNA手术组,选有18只SD大鼠,该组大鼠同样采用改良2-V0法结扎双侧颈总动脉,不过在结扎双侧颈总动脉前24h,将Srxn1基因干扰片段注射于大鼠的侧脑室;E组为Nrf2-si RNA手术组,选有18只SD大鼠,采用的处理方法同D组,区别在与基因干扰片段为Nrf2基因干扰片段。2、模型的筛选:各组大鼠经造模处理后饲养观察30d,然后利用Morris水迷宫观察各组大鼠在Morris水迷宫观定位航行实验以及空间探索实验中的行为学表现,来评价各组大鼠的空间学习记忆能力,从而筛选出造模成功的目标VD模型。3、标本的制备:各组大鼠用过量的水合氯醛麻醉,断头取脑。于冰上迅速剥开颅骨,收取脑脊液并分离出脑海马组织,用事先冷藏的生理盐水漂洗,放进干净的EP管中,并做好标记后放入-80℃的超低温冰箱中保存。4、实验方法:按照SOD、MDA、Srxn1试剂盒说明书用酶标仪测各组脑脊液SOD、MDA、Srxn1浓度;各组海马组织加入蛋白裂解液后于预冷匀浆仪匀浆后,提取蛋白组织液,再用Western Blot法检测各组海马中Srxn1、Nrf2蛋白及用rt-PCR法检测各组海马中Srxn1的m RNA表达水平、干扰si RNA序列后脑海马组织中Nrf2 m RNA水平;结果1、动物模型的建立:从总例数为66例的大鼠中,排除死亡大鼠后,利用Morris水迷宫观察大鼠行为学变化,我们筛选出成功的VCI大鼠模型有46例,VCI大鼠模型造模成功率大于85%。2、定位航行实验中,以空白对照组大鼠为参照对象,假手术组大鼠的逃避潜伏期无明显的延长,其与空白对照组大鼠的逃避潜伏期之间的差异性不大,不具有统计学意义(P>0.05),而常规手术组大鼠与空白对照组大鼠相比,其大鼠的逃避潜伏期较空白对照组大鼠而言有延长,差异性显著,差异性有统计学意义(P<0.05);以常规手术组大鼠为参照对象,Srxn1-si RNA手术组大鼠的逃避潜伏期与常规手术组大鼠的逃避潜伏期相比,Srxn1-si RNA手术组大鼠的逃避潜伏期潜伏期延长,差异性显著,具有统计学意义(P<0.05),而Nrf2-si RNA手术组大鼠与常规手术组大鼠相比,该组大鼠的逃避潜伏期较常规手术组而言同样有延长,差异性显著,有统计学意义(P<0.05);此外,将Srxn1-si RNA手术组大鼠与Nrf2-si RNA手术组大鼠这两组大鼠进行比较,该两组大鼠的逃避潜伏期相比较无差异性,差异性无统计学意义(P>0.05)。3、空间探索实验中,以空白对照组大鼠为参照对象,假手术组大鼠与空白对照组大鼠相比较,其大鼠单位时间内穿越平台的次数以及在平台象限滞留的时间无明显差异性,差异性不具有统计学意义(P>0.05),常规手术组大鼠单位时间内穿越平台的次数与空白对照组大鼠相比有减少,差异性显著,具有统计学方面的意义(P<0.01),常规手术组大鼠在平台象限滞留的时间与空白对照组大鼠相比较有减少,差异性显著,具有统计学方面的意义(P<0.01);以常规手术组大鼠为参照对象,比较单位时间内平台的穿越次数、平台象限的滞留时间这两项指标,在Srxn1-si RNA手术组大鼠中这两项指标均减少,与常规手术组大鼠相比,这两项指标差异性均显著,且均具有统计学意义(P<0.05),而Nrf2-si RNA手术组大鼠与常规手术组大鼠相比,同Srxn1-si RNA手术组大鼠一样,该组大鼠单位时间内平台穿越的次数、平台象限的滞留时间这两项指标与常规手术组比较均减少,这两项指标的差异性同样显著,具有统计学方面的意义(P<0.05);将Srxn1-si RNA手术组大鼠与Nrf2-si RNA手术组大鼠相比较,这两组大鼠平台穿越的次数及平台象限滞留的时间,两组老鼠之间无显著差别,差异性不具有统计学意义(P>0.05)。4、空间探索实验中,以空白对照组为参照对象,另外四组大鼠在除平台象限外的其余各区域滞留的时间无显著性的差别,无统计学意义(P>0.05)。5、各组脑脊液中Srxn 1含量差异有统计学意义(P<0.05),各组大鼠脑海马组织Srxn 1的蛋白质表达水平差异无统计学意义(P>0.05),各组大鼠脑海马组织中Nrf2的蛋白质表达水平差异无统计学意义(P>0.05),各组大鼠脑海马中Srxn1的m RNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),各组大鼠脑海马中Nrf2 m RNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),干扰si RNA序列后脑海马组织中Nrf2 m RNA水平与其余各组无统计学差异。6、各组脑脊液中SOD活力值差异有统计学意义(P<0.05),各组脑脊液中MDA含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验结果显示1.Srxn 1的表达变化可能与血管性认知功能障碍疾病的发病不相关。