三七总皂苷对酒精诱导兔成骨细胞中骨钙素mRNA表达的影响

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目的:通过检测三七总皂苷对酒精作用于骨髓基质干细胞后成骨相关基因骨钙素mRNA表达的影响,从基因表达的层面上来研究三七总皂苷防治酒精性股骨头缺血坏死的作用机制。  方法:抽取四周龄大白兔的骨髓,采用密度梯度离心法与贴壁法相结合体外分离、培养兔骨髓基质干细胞。取第3代细胞,随机分为四组:空白组(A组)、模型组(酒精组,B组)、实验组1(酒精+三七总皂苷50ug/ml,C1组)和实验组2(酒精+三七总皂苷100ug/ml,C2组)。检测四组培养液中碱性磷酸酶、甘油三酯、骨钙素的含量及骨钙素mRNA的表达。  结果:(1)提取的骨髓基质干细胞呈贴壁生长,诱导后可向成骨细胞分化,细胞呈成骨细胞形态为梭形和多角形。细胞连续培养可以互相重叠呈复层生长,无接触抑制现象,并可形成钙化结节;(2)分组干预14天,模型组细胞内 ALP活性[(25±8)U/100 mg蛋白]明显降低,显著低于实验组1[(35±9)U/100mg蛋白]、实验组2[(38±10)U/100mg蛋白]和空白组[(39±9)U/100mg蛋白],P<0.05。两实验组细胞内ALP活性,与空白组比较差异无统计学意义,P>0.05。干预21天,模型组脂滴最多,两实验组较模型组明显减少(P<0.05),空白组未见明显脂滴出现。检测实验组1、实验组2和空白组中细胞内甘油三酯含量分别是(3.86±0.18)μg/孔、(3.80±0.19)μg/孔和(3.76±0.12)μg/孔,而模型组是(9.86±0.28)μg/孔。而骨钙素的含量分别是:4.36-17.51ug/L、4.95-19.46ug/L、5.42-20.33ug/L、2.81-15.62ug/L,骨钙素mRNA的表达分别为:0.795±0.028、0.897±0.035、0.927±0.021、0.380±0.026,两实验组细胞内骨钙素含量及骨钙素m RNA的表达,与空白组比较差异无统计学意义,P>0.05。  结论:⑴骨髓基质干细胞具有来源充足,取材方便,创伤小无明显并发症,而且其分化增殖能力较强,成骨能力确定;⑵从骨髓中分离、培养单个干细胞呈贴壁生长,成纤维细胞样外观;⑶三七总皂苷确能促进被酒精干预后的骨髓基质细胞向成骨细胞分化,为中药防治酒精性股骨头缺血坏死提供新的治疗靶点,并为下一步动物试验与临床应用提供科学理论依据。
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