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背景偏头痛是临床常见的周期性发作疾病,其发作给患者带来巨大的痛苦。目前临床对偏头痛的治疗效果有限,原因之一是对偏头痛周期发作的特点把握欠佳。时机理论体现了中医经典防治疾病的思想,其内涵强调对疾病变化规律的观察和把握,是提高临床疗效的突破点。偏头痛的现代病理机制研究发现偏头痛的发生伴随着血管收缩、舒张功能的障碍。而中医营卫学说认为维持脉管功能协调的关键在于“营卫和”。桂枝-白芍作为调和营卫法的经典药对,前期经过了临床和基础研究的双重验证,具有改善偏头痛症状和下调c-fos,血管内皮素-1等血管活性肽的作用,可以开展桂枝-白芍干预偏头痛时机的研究,为临床治疗偏头痛时机提供参考。而时机研究需要具有动态变化特点的偏头痛大鼠模型,时相性偏头痛大鼠模型是导师前期重要研究成果,具有收缩相-舒张相的血管变化特点,为时机研究提供了平台。本研究将进一步利用蛋白组学开展时相性偏头痛大鼠模型的通路-分子变化机制研究,为桂枝-白芍干预时机研究提供理论基础。综上,时相性偏头痛大鼠模型具备的动态变化特点为干预时机研究提供了最佳平台,桂枝-白芍可靠的临床疗效为干预偏头痛提供了手段,因此可以开展桂枝-白芍干预偏头痛时机研究,为偏头痛的临床干预时机提供借鉴。目的1.以时相性偏头痛大鼠模型为研究对象,利用蛋白组学对时相性大鼠模型收缩相-舒张相的通路-分子机制特征进行研究,即筛选差异蛋白,分析各个时相的蛋白变化特点;2.从时机理论出发,基于时相性偏头痛大鼠模型的分子机制动态变化特点,研究桂枝-白芍干预时机的问题,以期对临床治疗偏头痛时机问题提供参考。方法实验一:1.动物分组与造模:复制时相性偏头痛大鼠模型,将大鼠分为6组,空白组,多巴胺（Dopamine,DA）注射后11分钟取材（PDA-1）组,多巴胺注射后22分钟取材（PDA-2）组,多巴胺注射后33分钟取材（PDA-3）组,硝酸甘油注射后（Glyceryl Trinitrate,GTN）1小时取材（PGTN-1）组和硝酸甘油注射后2小时（PGTN-2）组,在各自的时间取大鼠三叉神经节,以达到对给个时间点进行分别进行蛋白组学研究的目的;2.蛋白组学检测:将取好的组织标本进行蛋白组学检测,从而获得三叉神经节整体蛋白表达水平的数据;富集分析:以P＜0.05,差异倍数（Fold Change,FC）＞1.2或＜1/1.2为条件筛选差异蛋白,并对差异蛋白进行富集分析,从而获得各个时点主导的通路与分子的数据,并分析彼此之间的相关性;实验二:1.动物分组与桂枝-白芍水煎液准备:将大鼠随机分为8组,即空白组,模型组,多巴胺注射前十分钟干预（DA-0）组,DA-1组,DA-2组,DA-3组,GTN-1组模型组和GTN-2组;制作桂枝-白芍水煎液,在各自的时间灌胃,最后统一于注射硝酸甘油3小时后取材;2.疗效评价:使用自主行为即痛苦面容和疼痛相关行为学机械痛阈作为桂枝-白芍干预时相性偏头痛大鼠模型的评价标准,并得出最佳干预组;3.指标检测:利用蛋白免疫印迹法检测大鼠三叉神经节的降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）,五羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）,c-fos,TRPV1（The transient receptor potential cation channel,vanilloid receptor subtype 1）和 TRPA1（The transient receptor potential cation channel,ankyrin receptor subtype 1）的含量;利用免疫组化法检测TRPV1和TRPA1通道的活性,以期对桂枝-白芍干预时机的进行解释。结果1.与空白组相比,PDA-1组有118个差异表达蛋白;PDA-2组有89个差异蛋白;PDA-3组有95个差异蛋白;PGTN-1组有71个差异蛋白;PGTN-2组有67个差异蛋白;2.PDA-1组,PDA-2组和PDA-3组富集的通路主要有氧化磷酸化（Oxidative phosphorylation）,肾素-血管紧张素系统（Renin-angiotensinsystem）,对含氧化合物的反应（Response to oxygen-containing compound）,对压力的反应（Response to stress）,过氧化氢的代谢过程（Hydrogen peroxide metabolic process）,过氧化氢的分解过程（Hydrogen peroxide catabolic process）,细胞对含氧化合物的反应（Cellular response to oxygen-containing compound）,调节过氧化氢代谢过程（Regulation of hydrogen peroxide metabolic process）,活性氧代谢过程（Reactive oxygen species metabolic process）,对活性氧的反应（Response to reactive oxygen species）,氧化还原过程（Oxidation-reductionprocess）等,PGTN-1 组和 PGTN-2组的主要富集通路有PI3K-Akt信号通路（PI3K-Akt signaling pathway）,环磷酸腺苷信号通路（cAMP signaling pathway）,TRP通道的炎性介质调节作用（Inflammatory mediator regulation of TRP channels）免疫反应（Immune response）,细胞对肿瘤坏死因子反应（Cellular response to tumor necrosis factor）等;3.DA-2组即注射多巴胺22分钟后是桂枝-白芍干预时相性偏头痛模型大鼠时机,其机制可能是通过上调5-HT和下调TRPV1,TRPVA1和c-fos的表达。结论1.时相性偏头痛大鼠模型收缩相和舒张相的分子机制具有动态变化的特点,收缩相可能以氧化应激状态为主,而舒张相以TRPV1通路和相关的炎性通路为主。2.桂枝-白芍干预时机可能在时相性偏头痛大鼠模型收缩相时,DA-2组即注射多巴胺22分钟后为桂枝-白芍干预时机,DA-2组可能是在注射多巴胺22分钟后通过下调了 TRPV1和TRPA1通道达到治疗目的。