窖泥的综合性分析及功能微生物的筛选

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lqh2012
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浓香型白酒以窖池为发酵容器,采用半开放式多菌种协同固态发酵的方式生产,窖泥微生物对白酒品质改善及特征香气的形成具有重要的影响。窖泥中厌氧菌的分离、鉴定及其挥发性代谢物分析,可为有效改善窖泥质量、生物强化白酒风味物质、溯源及控制白酒异嗅物质及开发液态法白酒生产菌种等提供理论和技术指导,同时也对改善人工窖泥质量起着至关重要的作用。本论文对窖泥进行高通量分析其微生物多样性,检测窖泥不同空间位置的理化指标,利用固相微萃取方式提取窖泥挥发性物质,将三方面与微生物分布多样性进行综合性分析,通过电场辅助筛选的方法分离窖泥产酸微生物并对窖泥产酸微生物的产酸能力进行对比研究,其结果如下:对窖泥进行深度划分,并对横向深度同样进行划分,进行高通量测序,对各空间位置的窖泥分析,结果发现:随着窖泥深度的增加,窖泥微生物群落的α和β多样性、窖泥理化指标、挥发性物质成分均具有明显的空间异质性。其中随着窖池深度的增加,α多样性指数(Chao1、Shannon、Simpson、ACE),理化指标中的水分、NH4+、腐殖质,挥发性物质成分种类均显著增加。窖泥p H值等各种理化因子与窖泥微生物分布具有显著的相关性,微生物分布的空间异质性同样导致窖泥挥发性物质成分存在异质性。窖泥主成分分析结果表明,pH、NH4+等理化指标可能是影响窖泥原核微生物群落空间分布的主要环境因子。对窖泥的理化指标、挥发性物质成分、微生物空间分布的相关性提供了实验基础。利用电场辅助筛选技术筛选窖泥微生物和利用普通涂布厌氧筛选方法做对比,两种方法共筛选得到23株形态具有差异的细菌,通过显微镜镜检初筛、16s r DNA测序以及初步产酸量复筛,结果为利用电场辅助筛选得到的3株菌产酸量及种类最高,分别编号C1-C3,在这三株菌中,C1产酸量最多,对其进行形态学观察及16S rDNA同源序列比对。结果发现,C1为酪丁酸梭菌(Clostridium butyricum)。以酪丁酸梭菌C1为初步研究对象,研究非厌氧条件与厌氧条件下的菌体扩繁速率的方法对比。初步得出:使用接种环刮取菌体少许,放置于RCM培养基内,使用非厌氧条件下的电场辅助装置,37℃恒温,4 m A恒定电流条件下培养,在3 d培养达到稳定期,同时在10 d时稳定产酸的总量可达4035 mg/L。
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