论文部分内容阅读
肺癌是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤，近年来发病率及死亡率逐年上升。肺癌动物模型对肺癌的发病机理研究及治疗药物筛选非常重要，但目前常用的肺癌模型中移植性肿瘤长势过快，与临床肿瘤差异很大；自发性与诱导性肿瘤发病率和成瘤时间很不稳定。因此，建立一种与临床肺癌生物学特征相似、致瘤稳定均一、重现性好、发病率高的肺癌动物模型对于研究肺癌的病因及筛选肺癌治疗药物，尤其是筛选十分有特色的肺癌治疗传统中药是肿瘤领域的迫切需要。本研究采用不同剂量乌拉坦、不同品系小鼠及不同致癌方案比较肺致癌率及平均肺结节数以确定最佳肺癌造模方法；通过生化指标检测及病理组织分析比较乌拉坦诱导的肺癌模型与临床人体肺癌发病的相似性；并通过寒热2种性质的中药对建立的肺癌模型进行佐证，提出肺癌新的发病机制，以期为临床肺癌的治疗提供新理念、新方法。在本研究中，乌拉坦800mg/kg腹腔注射、每周两次、连续5周的造模方式可在C57BL/6小鼠中4个月诱导出稳定均一、致癌率100%的肺腺癌，并能克服C57BL/6小鼠对乌拉坦诱导肺癌的基因抵抗。肺癌小鼠体内生化指标检测表明，该模型建立后荷瘤小鼠ColI、MMP-9、TIMP-1、NGF、TrkA、BDNF、TrkB、TGF-β1、bFGF、Ins、Glut-4水平均显著升高，肺组织LN、血清TC水平显著降低，且随着时间的延长与正常小鼠差异越显著。病理及免疫组化检测表明，该模型中诱导的小鼠肺癌符合临床中分化肺腺癌特征，表现为完整的腺囊结构、侵润性较低、部分瘤细胞充满囊腔，免疫组化TTF-1（+）、CEA（+）、P63（-）。在模型建立过程中，小鼠逐渐畏寒喜暖、蜷缩少动、尾部及耳廓血管暗紫、体温下降、ATP酶及LDH活性降低、全血粘度及红细胞聚集指数升高、微循环障碍等，表现出寒凝血瘀的中医学体征。温热药附子可减弱寒凝血瘀体征及不同程度改善肺组织中ColI、MMP-9、TIMP-1、NGF、BDNF、TGF-β1、LN异常水平，阻止肿瘤进程；寒凉药蒲公英加重寒凝血瘀体征，有促进肿瘤进展的趋势。为了验证拓展肿瘤的恶热喜寒特性，我们用乌拉坦400μg/ml处理人正常肝L02细胞建立转化细胞系，该转化细胞能在软琼脂上形成集落，线粒体数量增多，具有肿瘤细胞的一些恶性特质。明胶电泳及western blot结果显示转化细胞内MMP-9及TGF-β1表达明显多于正常细胞。另外，我们发现，与37℃比较，32℃培养能提高乌拉坦对L02细胞的转化率。综上所述，乌拉坦800mg/kg腹腔注射、每周两次、连续5周的造模方式可建立致瘤稳定均一、重现性好的小鼠肺癌模型。该模型与临床肺腺癌有较高的一致性，并伴有寒凝血瘀中医学体征，适合抗肿瘤中药的筛选与评价，也有利于研究肺癌的发病原因和制定合理的中药治疗方案。