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目的：探讨高分子量的碱性成纤维细胞生长因子（hi-FGF2）在HEK293细胞中过表达后是否导致细胞凋亡，并且其作用机制是否与B23相互作用后影响细胞中Akt的活化有关。 方法： 1.构建pDsRed1-N1真核表达载体：采用琼脂糖凝胶电泳技术，及胶纯化回收试剂盒进行DNA提取，质粒小提去内毒素试剂盒提纯扩增。 2.空载体pDsRed1-N1质粒的鉴定：采用双酶切法和琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。 3.质粒hi-FGF2-pDsRed1-N1的鉴定：采用PCR扩增DNA片段法和琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。 4.在HEK293细胞中过表达hi-FGF2：采用瞬时转染法，荧光倒置显微镜观察hi-FGF2的转染效率。 5. Western-blot法测定HEK293细胞中hi-FGF2过表达后的蛋白水平。 6. Western-blot法测定过表达hi-FGF2的HEK293细胞中p-Akt的蛋白水平。 7.检测过表达的hi-FGF2与B23的相互作用：采用免疫共沉淀法。 8.检测细胞凋亡：采用Annexin V-FITC/PI双染法，流式细胞仪（FCM）观察分析凋亡情况。 结果： 1.成功构建pDsRed1-N1真核表达载体。 2.空载体pDsRed1-N1鉴定正确。 3.质粒hi-FGF2-pDsRed1-N1鉴定正确。 4.成功转染hi-FGF2到HEK293细胞中，转染效率目测达到70％以上。 5.成功转染后hi-FGF2蛋白表达水平在50kDa左右。 6.过表达hi-FGF2的HEK293细胞中p-Akt蛋白水平下降。 7.过表达的hi-FGF2能够与B23相互作用。 8.过表达hi-FGF2后细胞凋亡明显增加。 结论： Hi-FGF2在HEK293细胞中过表达后导致细胞凋亡，其作用机制可能是FGF2过表达后通过与B23相互作用，下调p-Akt蛋白，导致p-Akt促细胞存活的作用减弱引起细胞凋亡。