论文部分内容阅读
第一章Luminal型乳腺癌肿瘤免疫微环境特征及其临床意义分析[目的]肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)在三阴性和HER2过表达型乳腺癌预后评估中具有重要的价值,但其与Luminal型乳腺癌的预后相关性尚不明确。因此我们评估了Luminal型乳腺癌患者肿瘤间质TILs水平和肿瘤浸润CD8+T细胞水平,同时通过分析免疫相关基因表达情况进一步探究Luminal型乳腺癌免疫微环境特征,并分析其与临床病理因素及预后的相关性。[方法]共收集596例经术后辅助内分泌治疗的绝经前期Luminal型乳腺浸润性癌患者,进行整张HE切片肿瘤间质TILs评估。其中160例进行CD8免疫组织化学染色,评估肿瘤间质浸润CD8+T细胞百分比(sCD8)和肿瘤细胞内CD8+T细胞百分比(iCD8)。分析TILs及CD8+T细胞水平与临床病理因素的相关性,并采用单因素及多因素Cox生存分析来检验TILs及CD8+T细胞水平是否与患者无病生存期(DFS)和总生存期(OS)具有相关性。入选病例中有62例样本成功进行了 RNA测序,对比分析不同分组间免疫相关基因表达及免疫细胞相对值差异。[结果]高水平TILs(≥10%,第三四分位数)更多见于高组织学分级(P<0.001)、Luminal B/HER2-(P<0.001)、Luminal B/HER2+分型(P=0.002)及高 Ki67 增殖指数(≥25%,P=0.014)病例中。sCD8(≥5%,第三四分位数)与临床病理因素之间也具有类似相关性,但iCD8与临床病理因素间无显著相关性。尽管TILs和sCD8水平与患者DFS或OS无显著相关性,但在单因素(HR=0.51,95%CI 0.26-0.96,P=0.042)和多因素(HR=0.48,95%CI0.25-0.92,P=0.027)Cox回归生存分析中均显示iCD8的存在(≥1%,第三四分位数)与患者更长的DFS显著相关,iCD8的存在同时也提示患者具有更长的OS,但尚未达到统计学差异(HR=0.35,95%CI 0.11-1.10,P=0.073)。RNA测序结果显示,整体Luminal型乳腺癌中TILs以CD4+辅助T细胞(29%)及M2型巨噬细胞(21%)为主,CD8+T细胞比例较低(1.3%),而不同分组间免疫相关基因表达、免疫调节信号通路及免疫细胞分布存在较轻微的差异,主要体现在非复发组中B细胞受体信号相关基因表达有所上调。[结论]在绝经前期Luminal型乳腺癌患者中,iCD8阳性提示患者具有更好的预后。TILs和sCD8与更强的肿瘤侵袭性相关,但与患者预后没有显著相关性。RNA测序结果显示Luminal型乳腺癌主要处于免疫抑制状态。第二章乳腺癌肿瘤浸润淋巴细胞与分子分型及预后的相关性分析[目的]肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)在不同分子分型乳腺癌预后评估及疗效预测中的价值可能存在差异。我们纳入中国人群大样本量乳腺癌病例,探究TILs水平在不同分子分型乳腺癌中的分布情况,并进一步分析其与临床病理因素及预后的相关性。[方法]共收集1032例经术后病理诊断为乳腺浸润性癌的非新辅助治疗病例,进行整张HE切片肿瘤间质TILs评估。分析TILs水平与分子分型及临床病理因素的相关性,并采用单因素及多因素Cox风险比例回归模型生存分析来检验TlLs水平是否会影响患者DFS及OS,同时按分子分型进行分层分析,进一步评估TILs在不同分子分型乳腺癌中与DFS及OS的相关性。[结果]高水平TILs(≥10%,第三四分位数)与ER、PR、HER2表达、高组织学分级及高Ki67增殖指数显著相关(P<0.001),同时更多见于Luminal B型、HER2过表达型及三阴性乳腺癌中(P<0.001)。TILs的高低与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及脉管侵犯无显著相关性。单因素及多因素Cox回归生存分析显示淋巴细胞为主型乳腺癌(LPBC,TILs≥50%)(HR=0.17,95%CI 0.04-0.68,P=0.013)为乳腺癌复发或转移的保护性因素,与非LPBC患者相比更不易出现复发/转移。按乳腺癌分子分型进行分层分析显示,在Luminal A型及Luminal/HER2-乳腺癌中TILs水平与DFS及OS均无显著相关性,在Luminal B/HER2-乳腺癌中TILs(连续性变量)(HR=0.97,95%CI 0.95-0.99,P=0.030)为影响患者DFS 的保护性因素,且 Luminal B/HER2+乳腺癌中高水平TILs患者较低水平者OS更长(HR=0.16,95%CI 0.04-0.74,P=0.019),生存分析显示在整体Luminal B型及HER2+乳腺癌中TILs(连续性变量、10%为界值的二分类变量)水平为影响DFS及OS的保护性预后因素。[结论]TILs水平在不同分子分型乳腺癌中存在异质性,Luminal A型乳腺癌中TILs水平显著低于Luminal B/HER2-及Luminal B/HER2+乳腺癌、HER2过表达型及TNBC。TILs水平为影响乳腺癌患者DFS的独立保护性因素,LPBC病例更不易出现乳腺癌复发和转移。在Luminal型乳腺癌中,TILs的预后价值存在差异,其在Luminal A型及Luminal/HER2-乳腺癌中没有预后提示作用,而在Luminal B型(无论HER2状态)乳腺癌中,TILs水平越高提示患者预后越好。第三章三阴性乳腺癌中PD-L1(22C3)与PD-L1(SP142)表达对比及其临床意义分析[目的]探究程序性死亡配体-1(PD-L1)不同抗体克隆类型SP142及22C3在三阴性乳腺癌中表达情况,并分析其与患者临床病理因素及预后的相关性。[方法]收集259例三阴性乳腺癌手术组织样本,进行全切片SP142及22C3免疫组织化学染色,分别评估肿瘤细胞及肿瘤浸润免疫细胞PD-L1表达情况,同时收集患者临床病例资料并进行预后随访,分析两种抗体表达差异及其与患者临床病理因素的相关性,并采用单因素和多因素Cox 比例风险回归模型分析PD-L1表达与无病生存期(DFS)和总生存期(OS)之间的相关性。[结果]SP142(ICs≥1%)与22C3(CPS≥1)阳性表达率分别为42.1%及41.3%,二者总符合率为82.33%,阳性表达病例Kappa值为0.571,SP142及22C3阳性表达病例分布差异有统计学意义(P<0.001)。两种抗体阳性患者均不易出现脉管侵犯(P=0.024,P=0.003),但组织学级别及Ki67增殖指数更高(P<0.001);PD-L1(SP142)阳性患者复发/转移率显著低于阴性患者(P=0.016)。单因素(HR=0.39,95%CI0.77-0.85,P=0.019)及多因素(HR=0.43,95%CI 0.20-0.96,P=0.039)Cox回归生存分析均显示SP142表达是影响患者DFS的保护性预后因素;尽管SP142表达与OS没有显著性关联,但单因素Cox回归生存分析显示SP142表达也有相似趋势,提示患者具有较长的 OS(HR=0.41,95%CI 0.17-0.96,P=0.041;Log Rank P=0.035)。与SP142相似,22C3阳性表达也有趋势提示患者DFS(HR=0.63,95%CI 0.31-1.28,P=0.200)及 OS(HR=0.75,95%CI0.35-1.63,P=0.47)更长,但均未显示出统计学意义。[结论]PD-L1表达在三阴性乳腺癌中具有明显异质性;不同抗体克隆22C3与SP142在TNBC中表达情况存在差异,在临床检测中二者不可相互替代;SP142与22C3阳性表达均显示患者预后更好,PD-L1(SP142)阳性患者DFS明显延长。