研究背景与目的骨髓炎是骨科的常见病,但其的发病率与复发率继续上升。其中金黄色葡萄球菌感染占所有病例中的80%。最近的研究表明,金黄色葡萄球菌有能力穿透人皮质骨和细胞内感染骨细胞。然而,常规的检验很难发现成骨细胞感染金黄色葡萄球菌的这种胞内感染的情况。从而,无法判断骨组织感染的来源及使用何种合适的治疗方案来控制骨组织感染相关的疾病。circRNA是一类高丰度、高稳定性、多样并且保守的ncRNA。环状RNA不易降解,能在血浆、唾液等体液中稳定存在,可以作为新型疾病分子标志物。并已经在感染性疾病、骨科疾病等多种疾病中作为患者血液中临床生物标志物。成骨细胞感染金黄色葡萄球菌过程中circRNA是否能作为临床生物标志物目前并不清楚。本研究的目的是探讨人成骨细胞的circRNA在金黄色葡萄糖感染过程中的表达谱,识别出具有意义的circRNA,为能早期诊断人成骨细胞胞内感染所导致的骨科感染性疾病奠定检验基础。研究方法通过人成骨细胞HFOB1.19和金黄色葡萄球菌的培养及细菌入侵到细胞胞内实验,用流形细胞仪检测感染的Hfob1.19细胞,应用绿色荧光阳性细胞占总细胞的百分数来代表细菌对细胞的侵入率。平均每个细胞内的CFSE荧光强度大小代表侵入到细胞内的细菌数量。建立了金黄色葡萄球菌感染人成骨细胞HFOB1.19的模型。使用NEBNext rRNA Depletion Kit（New England Biolabs,Inc.,Massachusetts,美国）去除样品中的核糖体 RNA（rRNA）。使用 NEBNext? UltraTM Ⅱ Directional RNA Library Prep Kit（New England Biolabs,Inc.,Massachusetts,美国）构建测序文库。高通量测序选择具有明显和一致的差异表达的circRNA,再通过生物信息学分析,聚类得到具有明显差异表达的circRNA。通过相似的代谢功能发现了相应的基因,并研究了这些基因与circRNA的关系。最后为了验证来自选择的circRNA,设计了特异性引物。对靶RNA和每个样品的内部参数进行qRT-PCR验证。结果1.统计分析结果表明,细胞存活率在30min和4h内保持稳定,在感染剂量从MOI为25到500时,含有细菌的成骨细胞的数量逐渐增加,到MOI为250:1时感染侵入率达到93.28%。因此,感染时间为4小时,MOI为250:1时的样本适合选择用于文库构建和序列测定。2.生物信息分析显示环状RNA在正常成骨细胞和被金黄色葡萄球菌感染的成骨细胞的表达谱存在显著差异,经过多种统计分析hsacirc0085769在金葡菌感染的成骨细胞中成高表达,且其表达水平与PTK2（蛋白酪氨酸激酶2）蛋白表达水平呈正相关,同时可能通过对细菌侵袭上皮细胞信号通路起正性调控作用。而hsacirc0002483在金葡菌感染的成骨细胞中明显成下调表达,且其表达水平与PTK2蛋白表达水平呈负相关,其可能与细菌侵袭上皮细胞信号通路起负性调控作用,进而影响成骨细胞在被金黄色葡萄球菌感染的过程。结论1.环状RNA在正常人成骨细胞和被金黄色葡萄球菌感染的成骨细胞的表达存在差异。2.发现hsacirc0085769和hsacirc0002483在金葡菌感染的成骨细胞中其表达水平与PTK2蛋白表达水平相关,参与细菌侵袭上皮细胞信号通路调控作用,进而影响成骨细胞在被金黄色葡萄球菌感染的过程。具有较高的临床运用价值。